遙感定義范文

導語：如何才能寫好一篇遙感定義，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公文云整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

誤區一:與病毒感染者接觸就會被傳染

去年年底,“取消入學就業體檢中乙肝檢測項目”并未完全終結由來已久的乙肝歧視,仍有部分人誤以為一塊工作、吃飯就能傳染。

莊輝院士再次強調:乙肝病毒傳播主要通過血液、母嬰和性傳播。一般的日常生活接觸,比如共同進餐、一起工作,都不會傳播。

誤區二:慢性乙肝一定會在母嬰間傳播

“乙肝母親會不會生出乙肝寶寶”成了許多家庭的隱憂。莊輝指出,如果母親是慢性乙肝患者,應積極接受抗病毒治療,病情得到控制后再懷孕;若母親是乙肝病毒攜帶者,則無需抗病毒治療就可懷孕,但要加強隨訪。分娩時應加強新生兒保護,出生后立即注射乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗,能大大降低感染風險,切斷母嬰傳播。

誤區三:盲目追求表面抗原“轉陰”

乙肝病毒表面抗原轉陰是很多病人的夢想。張鴻飛表示,目前長效干擾素等藥物確實有助于提高轉陰比例,但只能幫助10%左右的患者。沒有必要盲目追求轉陰,抗病毒才最重要。她進一步說,實現病毒表面抗原轉陰就像贏得“金牌”,其實能贏得“銀牌”也很好。對e抗原陽性患者來說,銀牌就是實現e抗原血清學轉換(即大三陽轉為小三陽)。這能大大降低患者日后得肝硬化、肝癌的風險。

誤區四:乙肝都得終身治

篇2

那天朱清章打零工回家后，發現母親精神恍惚，嘴里不停地念叨：“都沒了，都沒了，怎么會燒了呢……”直到朱清章在爐筒的炭灰里發現了破碎的錢，才知道發生了什么事。原來，他母親為了給他娶媳婦，每天省吃儉用一點點地攢錢。好不容易攢了1300元錢，覺得放到哪兒都不安全，于是就藏到了爐筒里。那年的雪下得比往年都早，那天，母親估計兒子快回家了，就生起炭火，想給兒子暖暖身子，卻忘了放在爐筒里的1300元錢。到了晚上，朱清章的母親突然倒地，他趕忙將母親送到了包頭市醫院，經過治療，母親的命是保住了，但從此卻成了植物人。半年后，朱清章含淚將母親接回家中療養。

在此之前，朱清章的父親就因為常年的井下作業，患上了外傷性震顫麻痹綜合癥，這種病發作的時候，四肢不間斷地震顫，到后來發展成半身不遂，躺在床上不能動彈。母親病倒后，朱清章從此挑起照顧兩位老人的重擔。這時，他已從鄰居的口中知道了自己是抱養來的孩子，但朱清章早已將兩位老人視為親生父母，他要盡到一個兒子應有的孝心。

每天早上5點，朱清章就起床給母親按摩，從腿部到頭部，拍打、滾動、搓揉，半個小時后，再給父親洗臉做早飯。等一切忙完后，7點半，他小跑著去打零工的工地上干活。傍晚6點，他回到家，再次給母親按摩，然后清洗換下來的被單衣服和屎尿布。那時，朱家門前常年晾曬的被單和飄揚的布頭成了鄰居們眼中熟悉的風景。

1997年，癱瘓在床14年的父親去世了，沒有多久，妻子患胃癌也離開人世。朱清章似乎一下子被打垮了，但當他看到床上安睡的母親，他想，他不能倒下，他要堅強。

朱清章擦干眼淚，一邊照顧兩個孩子，一邊一如既往地悉心照料著母親，操持著這個一貧如洗的家。苦悶時，他就俯身和母親嘮叨幾句，雖然母親總是沒有回應，可他總覺得母親在傾聽。

2003年的一天，朱清章跟平常一樣，照例和母親嘮家常。當他問母親想吃什么時，她竟然清晰地說：“粥……”他被母親清晰的回答嚇了一跳，忙說：“媽，您再重復一遍。”“粥。”這是母親30年來的第一句話，朱清章的眼淚唰唰地往下流，一把將母親抱住，哽咽著說：“媽，您會說話了！您會說話了！”

2004年中秋節，朱清章給母親做了她最愛吃的炒雞蛋，喂過母親后，他剛要離開，忽然感覺有人拽自己的衣服，母親竟然用手拽著自己的衣服，并用兩個手指捏起一塊雞蛋，示意朱清章吃。這是母親30年來的第一個動作，母親能動了！

生命的奇跡還在繼續。2006年的一天，朱清章在火爐上燒了一壺水后，便出去劈柴，20分鐘后，當朱清章回到屋里時，驚奇地發現母親一只手提著水壺站在火爐邊，含混不清地責怪著朱清章：“水都燒開了，你干什么去了？”從此，這個在床上一躺就是31年的老人終于能下床活動了。

如今，88歲的老人家不僅能下地行走，還能自己生火、做飯，和兒孫們盡享天倫之樂。

31年最美麗的生命守候，31年的不離不棄。這是一場大愛的馬拉松，朱清章，從不敢停下腳步，他一定要贏。

篇3

替比夫定是2006年10月25日美國　FDA批準新型左旋核苷類藥物，用于治療慢性乙型肝炎。替比夫定是目前為止FDA批準的第4個治療慢性乙肝的核苷(酸)類似物，也是其中惟一一種屬于妊娠分類B級的藥物。替比夫定具有抗病毒作用強、不良反應小、臨床耐藥發生率低、無致癌性、無致畸性、無致突變性、無線粒體毒性的優點，被認為有很好的臨床應用前景。該藥物于2007年4月8日在我國正式上市。

作用機制和作用特點

替比夫定(B－L－2’－脫氧胸腺嘧啶苷)對乙型肝炎病毒的DNA聚合酶具有特異性抑制作用，而對人類DNA聚合酶或其他人類病毒的活性沒有影響。替比夫定為天然胸腺嘧啶脫氧核苷的自然L型對應體，是人工合成的胸腺嘧啶脫氧核苷類抗乙肝病毒DNA多聚酶藥物，具有選擇性抑制乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸聚合酶的活性的作用。替比夫定在細胞激酶的作用下被磷酸化為有活性的代謝產物5’－腺苷。替比夫定5’－腺苷通過與HBV天然底物胸腺嘧啶的5’－腺苷競爭，從而抑制HBV-DNA多聚酶的活性。通過整合到HBV-DNA，中造成乙肝病毒DNA鏈延長的終止，從而抑制乙肝病毒的復制。替比夫定同時抑制乙肝病毒DNA第1鏈和第2鏈的合成，而且對第2條鏈的抑制作用更明顯。替比夫定5’－腺苷濃度≤100μm時不會抑制人體細胞DNA多聚酶，濃度≤10μm時未觀察到明顯的細胞線粒體毒性。本品不被艾滋病毒核苷類逆轉錄酶抑制劑地丹諾新和司他夫定所拮抗，對人免疫缺陷病毒I型無活性，而且不拮抗阿巴卡韋、地丹諾新、恩曲他濱、拉米夫定，司他夫定、替諾福韋或齊多夫定的抗HIV活性。

藥物動力學

健康志愿者與慢性乙肝病人服用替比夫定的藥代動力學相似。在服用1～4小時(中值為2小時)后，低谷血藥濃度為0.2～0.3μm/ml，1次/d，600mg/次，連續給藥5～7天后達到穩態濃度，藥物半衰期為15小時。單劑600mg服用時，食物(高脂肪)、高能量不影響替此夫定的藥代動力學。體外試驗表明替比夫定與人血漿蛋白結合率低(3.3％)。口服后，本品在血液中被血漿和血細胞分開，并迅速在周圍組織中分布。替比夫定對下列常見的任何一種人體CYP450酶都無抑制作用：CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4。替比夫定通過被動擴散的方式以原藥的形式通過腎臟排出，腎臟分泌是清除替比夫定的最主要途徑。因此，中、重度腎功能不全或正在進行l血液透析者應相應調整劑量和服用方法。

在臨床應用中的安全性

適應證：本品適用于治療有乙型肝炎病毒活動復制，并伴有血清氨基酸轉移酶(ALT或AST)持續升高，或肝臟組織學活動性病變的肝功能代償的成年慢性乙型肝炎患者。

一般不良反應：大部分不良反應為輕度或中度，常見虛弱、頭痛、腹痛、惡心、(胃腸)氣脹、腹瀉和消化不良。但這些不良反應均能夠耐受，沒有必要進行劑量調整或中斷服藥。

篇4

[關鍵詞] HPLC；安胎益母丸；芍藥苷

[中圖分類號] R927.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）34-90-02

Determination of Paeoniflorin in Antai Yimu Pill by HPLC

WANG Zhengyu ZHAO Xiangyang

Suzhou Institute for Food and Drug Control in Anhui Province，Suzhou 234000，China

[Abstract] Objective To establish the methods of determination of paeoniflorin in Antai Yimu Pill. Methods HPLC was used and acetonitrile-water（15∶85） mixture as a mobile phase. The detection wavelength was set at 230nm. Results Paeoniflorin showed a good linear relationship at a ranger of （15.40-154.00）μg/mL，（r=0.9999）. The average recovery was 99.6%，and RSD was 0.64%（n=6）. Conclusion The method is simple with good reproducibility and can be used in quality control of Antai Yimu Pill.

[Key words] HPLC；Antai Yimu Pill；Paeoniflorin

安胎益母丸是衛生部中藥成方制劑第十二冊的品種，由益母草、香附、川芎、當歸、續斷、艾葉、白芍、白術等17味中藥組成，具有調經、活血、安胎的功效，用于氣血兩虧、月經不調、胎動不安。本研究參考相關文獻[1-5]對處方中的白芍建立了含量測定方法，為有效控制該藥物的內在質量提供了專屬性強、操作簡便、快速、準確的方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀；十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；1260VWD紫外可變波長檢測器；Agilent C18色譜柱；梅特勒AB-135S電子分析天平（0.01mg）。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200732）；安胎益母丸（安徽雪楓制藥廠，批號：20090703，20090904， 20091003）。試劑：水為純化水，乙腈為色譜純，甲醇為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Agilent C18（4.6mm×150mm；5.0μm）；流動相：乙腈-水（15∶85）；流速：1.0mL/min；檢測波長為230nm；進樣量：10μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取芍藥苷對照品適量（置P2O5干燥器中真空干燥24h），加甲醇制成每1mL含芍藥苷0.154mg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品研細，精密稱取4g，置錐形瓶中，精密加甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，經0.45μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。同法，制得不含白芍的陰性對照液。

2.4 陰性對照試驗

按照本品的處方、制法制備不含白芍的模擬樣品，按供試品溶液制備方法制成白芍陰性對照溶液，將芍藥苷對照品溶液、供試品溶液和白芍陰性對照溶液分別注入高效液相色譜儀進行測定，結果表明處方中其它成分不干擾芍藥苷的測定。見圖1。

2.5 線性關系考察

精密吸取對照品溶液1、2、4、6、8、10μL注入液相色譜儀進行分析。以芍藥苷峰面積值為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y=1164.60X+28.14，r=0.9999。結果表明芍藥苷在（0.154～1.54）μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗

取同一供試品溶液（批號：20090703），精密量取10μL，注入液相色譜儀，重復進樣5次，測定峰面積，結果芍藥苷峰面積RSD為0.45%（n=5），表明精密度良好。

2.7 穩定性試驗

取同一供試品溶液（批號：20090703），每隔2h進樣10μL，依法測定芍藥苷峰面積值，RSD為芍藥苷0.36%（n=6），結果表明供試品溶液在12h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的安胎益母丸（批號：20090703）6份，分別精密加入芍藥苷對照品適量，精密加50mL甲醇，按含量測定方法制備供試品溶液，依法測定，計算回收率。見表1。

2.9 樣品測定

取本品研細，精密稱取4g，置錐形瓶中，精密加甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，經0.45μm微孔濾膜過濾，精密量取10μL，注入液相色譜儀，計算芍藥苷含量。見表2。

3 討論

3.1 測定波長的選擇

取本品供試品溶液，經紫外分光光度計全波長掃描，發現在230.1nm處吸收強度大，確定230nm為檢查波長。

3.2 流動相的選擇

試驗摸索階段分別用乙腈-水（15∶85）、甲醇-水-冰醋酸（15∶90∶1.0）、乙腈-0.05%冰醋酸（17∶83）為流動相進行試驗，考察了分離度、理論塔板數等情況，綜合考慮以乙腈-水（15∶85）為流動相時，芍藥苷分離效果和適用性較好。

本文擬定的含量測定方法簡便、快速、重現性好，為安胎益母丸的質量檢查提供了實驗依據。

[參考文獻]

[1] 李亞紅，王鳳雙，袁兆坤. HPLC測定八珍益母片中芍藥苷的含量[J]. 安徽醫藥，2009，13（8）：898-899.

[2] 高立金，郭志鵬. RP-HPLC法測定柴黃升板顆粒中芍藥苷的含量[J]. 中國藥師，2009，12（9）：1264-1265.

[3] 易潤青，李藝，宋粉云. HPLC法測定清瘟解毒片中芍藥苷的含量[J]. 廣東藥學院學報，2009，25（4）：379-381.

[4] 楊忠蘭，石尚友. RP-HPLC法測定血府逐瘀口服液中芍藥苷的含量[J]. 中國藥房，2008，19（21）：1648-1649.

[5] 陳艷霞. HPLC測定九味乳安糖漿中芍藥苷的含量[J]. 中成藥，2008， 30（9）：I0023-I0024.

篇5

江蘇省靖江市人民醫院感染科，江蘇靖江 214500

[摘要] 目的 探討阿德福韋酯與拉米夫定聯合用藥在107例乙肝肝硬化中的療效。方法 將入住該院的214例乙肝肝硬化的患者隨機分為對照組(n=107例)與觀察組(n=107例)。兩組均按常規保肝治療，在此基礎上對照組單獨口服拉米夫定，觀察組給予阿德福韋酯與拉米夫定聯合用藥治療。對比兩組治療后谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、血液總膽紅素(TBIL)、 HBV-DNA轉陰率、、肝腎功狀況Child-Pugh評分以及治療藥物耐藥性等來評定治療效果。 結果 治療后，觀察組的生化指標(ALT、AST、TBIL)明顯優于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)；觀察組經聯合用藥治療后轉陰率明顯優于單獨用藥的對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)；觀察組的Child-Pugh評分明顯優于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)；觀察組藥物耐藥性明顯低于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。結論 阿德福韋酯與拉米夫定聯合用藥的治療效果好，可改善患者的生存質量及預后效果，值得在臨床上推廣。

關鍵詞 阿德福韋酯；拉米夫定；乙肝肝硬化

[中圖分類號] R512.62 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）09（b）－0110-02

[作者簡介] 丁松(1976.10-)，男，江蘇靖江人，本科，主治醫師，研究方向:感染學，側重于發熱待查和乙肝的抗病毒治療。

乙型肝炎是一類全球多發性疾病，盡管我國已將乙肝疫苗在全國人口中進行普及，但中國乙型肝炎病毒的攜帶率和發生率仍排在全球前列。在我國，肝硬化患者中半數以上是由乙型肝炎導致的，由此可見，確立針對于乙肝肝硬化的最優治療方案便顯得尤為重要[1]。導致乙型肝炎的元兇為乙肝病毒，故在臨床治療時應采用抗病毒類藥物，常用抗病毒藥物有核苷類及干擾素兩類[2]。干擾素由于對機體的損傷較大，存在一定的禁忌證，所以核苷類藥物成為治療乙肝肝硬化的指定臨床用藥。經過長期的科學研究和臨床試驗，阿德福韋酯和拉米夫定單獨用藥可有效的提高乙肝肝硬化患者的生活質量和生存壽命。為探討阿德福韋酯與拉米夫定聯合用藥在107例乙肝肝硬化中的療效，該研究分析2008年1月—2013年12月間入住該院的214例乙肝硬化患者的臨床資料，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將入住該院的214名乙肝肝硬化的患者(男120例,女94例)隨機分為兩組。其中觀察組107例，采用阿德福韋酯和拉米夫定兩種核酸類抗病毒藥物同時使用的治療方案(男59例，女48例)，年齡分布為20~71歲，平均(38.9±4.4)歲。對照組107例(男61例，女46例)，施行單獨口服拉米夫定的治療方案，年齡分布為21~75歲，平均(38.1±5.3)歲。214例患者均經生化學檢查、B超等物理檢查及病毒學檢測證實為乙肝導致的肝硬化，并排除肝性腦病等重大疾病，且在治療前6個月內未使用過其他抗病毒類藥物。

1.2 方法

兩組均按常規保肝治療，給予保肝利膽藥物、間接輸入白蛋白、使用利尿劑等對癥治療。在此基礎上給予觀察組患者阿德福韋酯與拉米夫定同時用藥治療，其用藥具體方案為：口服阿德福韋酯(20060665) 10 mg/d，1次/d；口服拉米夫定(20030581) 100mg/d，1次/d，療程在12個月。給予對照組單獨口服拉米夫定，其具體用藥方案為：口服拉米夫定100 mg/d，1次/d，療程在12個月。

1.3 觀察指標

治療后，具體觀察指標包括患者谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、血液總膽紅素(TBIL)； HBV-DNA轉陰率；并且對患者的肝腎功狀況進行Child-Pugh評分，以及耐藥性。

1.4 統計方法

采用spss15.0軟件對數據進行分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗；計數資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 兩組生化指標的比較

比較觀察組及對照組治療后各生化指標(ALT、AST、TBIL)，各數據明顯優于對照組，經統計學分析，差異有統計學意義(P＜0.05)。這表明聯合用藥能促進患者肝功能恢復。見表1。

2.2 治療后HBV-DNA轉陰率的比較

對兩組乙肝肝硬化患者治療后的HBV-DNA轉陰率進行比較分析。經統計學比較后得出觀察組經聯合用藥治療后轉陰率明顯優于單獨用藥的對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。這表明聯合用藥能有效抑制病毒的復制，促進病情恢復。見表2。

2.3 治療前后Child-Pugh評分變化的比較

比較觀察組及對照組治療后Child-Pugh評分，經統計學分析，觀察組明顯優于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。這表明聯合用藥治療后的肝臟儲備功能更好。見表3。

2.4 兩組治療后耐藥率的比較

比較觀察組及對照組治療后耐藥性，觀察組在12個月治療期間未出現耐藥患者，而對照組的耐藥性出現率為27.6%，觀察組明顯低于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。這表明聯合用藥更安全，耐藥性更低。見表4。

3 討論

盡管我國在全國人口中普及預防乙肝疫苗，增強乙型肝炎傳播途徑的宣傳教育等，但我國的乙型肝炎發生率依然位于世界前列。在乙型肝炎及其攜帶者中，有20%~40%的概率發展為肝硬化，最終有可能惡化為肝癌，預后不佳[3]。故針對此病患者的最佳臨床治療方案的確立顯得尤為迫切。現代醫學研究發現[4]，人體內HBV-DNA的復制程度高低與乙肝肝硬化患者的預后呈正相關，即患者體內的HBV-DNA的復制程度越高，乙肝肝硬化的惡化度越高，病情越易反復發作，最終結果可能會導致肝惡性腫瘤，甚至死亡。導致乙型肝炎的元兇為乙肝病毒，故在臨床治療時應采用抗病毒類藥物，常用抗病毒藥物有核苷類及干擾素兩類。現代醫學中，經過實驗室研究及臨床試驗已達成共識，即在保肝利膽的同時，采用抗病毒藥物針對HBV-DNA的復制進行治療，是乙肝肝硬化治療的臨床標準。由于干擾素對人體損害較大，使用時有很多禁忌癥，而乙肝肝硬化患者由于肝功能儲備能力差，身體條件差，所以干擾素不作為乙肝肝硬化的臨床指定用藥。因而快速、高效、不易出現機體耐藥的核苷酸(類似物)類藥物成為了臨床首用藥。

阿德福韋酯的藥理作用是通過抑制細胞內的HBV-DNA聚合酶的活性，從而得到阻礙HBV-DNA的復制的目的[5]。阿德福韋酯具有耐藥率低的特點，所以在我國臨床較早便被應用于治療乙肝肝硬化，但由于其具有腎毒性，故治療時只可采用小劑量用藥，同時阿德福韋酯的起效慢，導致抑制效果差，治療效果不夠顯著，單獨使用存在一定的不足[6]。而拉米夫定的藥理作用是直接作用于HBV-DNA鏈，通過競爭抑制HBV-DNA鏈延長與合成來得到抑制病毒復制的目的。此藥擁有起效快的特點，但由于其耐藥率高，故長期使用效果不佳。

該院在對所有患者常規保肝利膽藥物、間接輸入白蛋白、使用利尿劑等對癥治療的同時，將患者隨機分為兩組。該研究結果顯示，觀察組的ALT、AST、TBIL明顯低于對照組，這表明聯合用藥能促進患者肝功能恢復；觀察組HBV-DNA轉陰情況更好，耐藥性更低，這表明聯合用藥抑制病毒的復制，促進病情恢復，耐藥性方面控制的更好；且觀察組Child-Pugh評分低于對照組，顯示觀察組治療后的肝臟儲備功能更好。這一研究結果與代雪楓[7]、彭奇等人[8]的研究結果一致，表明聯合用藥的療效確切。

故兩種藥物聯合使用，在臨床上可以得到了較好的治療效果，同時改善了患者的生存質量及預后，值得在臨床上推廣。

參考文獻

[1] 李自芳. 拉米夫定聯合阿德福韋酯對活動性乙肝肝硬化長期治療的療效[J]. 中外醫療,2013,32(8):112-113.

[2] 李勇. 拉米夫定聯合阿德福韋酯治療活動性乙肝肝硬化的長期臨床效果觀察[J]. 中國醫藥指南,2012,11(34):129-130.

[3] 李文剛,聶為民,何艷梅,等. 拉米夫定聯合阿德福韋酯治療活動性乙肝肝硬化長期療效觀察[J]. 山東醫藥,2011,51(36):80-81.

[4] 陳天江. 阿德福韋酯聯合拉米夫定治療乙肝肝硬化的臨床效果觀察[J]. 胃腸病學和肝病學雜志,2014,23(2):200-202.

[5] 連曉明,覃舒揚,莫金榮,等. 阿德福韋酯聯合拉米夫定與恩替卡韋單藥治療乙肝肝硬化療效比較[J]. 海南醫學,2013,24(22):3303-3305.

[6] 李超. 恩替卡韋聯合阿德福韋酯對拉米夫定耐藥乙肝肝硬化的療效[J]. 胃腸病學和肝病學雜志,2013,22(11):1141-1143.

[7] 代雪楓,馬勇,涂遠航,等. 阿德福韋酯聯合拉米夫定治療早期乙肝肝硬化的臨床分析[J]. 臨床內科雜志,2011,28(9):622-624.

篇6

關鍵詞乙型肝炎; 慢性; 拉米夫定;耐藥;阿德福韋酯: 葉下珠

我國為乙肝高流行區,,每年約有35萬人死于與乙肝相關的疾病,嚴重危害著人們的身體健康。至1998年拉米夫定在中國上市以來,在很大程度上減少乙型肝炎患者的發病率,延緩肝纖維化的進展,但隨著用藥時間的延長 其耐藥率逐漸增加,部分患者因此病情加重。 為此, 我院于2006年9開始應用阿德福韋酯聯合葉下珠膠囊治療拉米夫定耐藥的HBeAg陽性慢性乙型肝炎, 現報道如下:

1資料與方法

1.1臨床資料

68例均為我院門診或住院患者, 入選標準:①符合2000年《病毒肝炎防治方案》中病毒性肝炎診斷標準[1]。②HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBV DNA>105拷貝/ml。③治療前ALT >正常值2倍。④應用拉米夫定治療1年以上無明顯療效(HB-VDNA下降

1.2根據1∶1的比例隨機分為阿德福韋酯組和聯合治療組

其中阿德福韋酯組34例, 男21例, 女13例, 年齡(29.8±12.6) 歲。聯合治療組34例, 男19例, 女15例, 年齡(33.2±10.6) 歲。兩組間人口學特征及臨床特征經統計學處理, 差異無顯著性(P>0.05) ,具有可比性。

1.3治療方法

阿德福韋酯組給予阿德福韋酯10 mg, 每日1次, 共48周。聯合治療組在阿德福韋酯組治療的基礎上, 加用葉下珠膠囊1g/次,3次/d, 連用48周。

1.4觀察項目

兩組治療前、治療后24周、48周時肝功、腎功、HBV DNA、乙肝5項指標。

1.5統計學方法

兩組率的比較采用x2檢驗。

2結果

3討論

在慢性乙型肝炎的治療中,抗病毒是關鍵。拉米夫定治療慢性乙型肝炎取得了明顯療效, 通過抑制HBV復制, 使血清ALT恢復正常, 改善肝臟炎癥活動, 延緩纖維化的進展[2,4]。但長期應用后易出現病毒變異和臨床抗藥性, 治療1年后發生臨床耐藥的比率可達23%或更高, 且某些拉米夫定耐藥者可發生重型肝炎和肝病進展[5,6]。

阿德福韋酯是新一代核苷類似物, 是活性成份阿德福韋的前體藥物, 口服后在體內迅速轉化為阿德福韋, 體內外試驗顯示, 阿德福韋可有效抑制HBV復制, 不僅對野生株有良好的抑制作用, 對YMDD變異株也有明顯抑制作用[7,8]但大劑量用藥具有一定的腎毒性,其療效受到一定限制,HBVDNA下降速度、HBeAg陰轉率、HBeAg血清轉換率仍不理想。葉下珠已有2000多年的藥用歷史,其味苦、性涼,具有平肝明目、收斂利水和解毒消積等功效。現代藥理研究證實,葉下珠具有抑制乙肝病毒復制及抗腫瘤、提高機體免疫功能的作用;能明顯降低四氯化碳引起的小鼠轉氨酶升高,抑制肝臟氧自由基的產生,而對人體無毒,對肝細胞損傷具有明顯修復作用[9]。

阿德福韋酯10 mg/d對拉米夫定耐藥HBeAg陽性慢性乙型肝炎患者治療24周時, 病毒應答率為53%, 生化應答率為53%,HBeAg陰轉率為15%, HBe轉換率為6%, 表明阿德福韋酯對拉米夫定耐藥HBeAg陽性慢性乙型肝炎有顯著療效。而48周時,病毒應答率為59%, 生化應答率為68%, HBeAg陰轉率為26%,HBeAg轉換率為12%, 表明阿德福韋酯對拉米夫定耐藥HBeAg慢性乙型肝炎的治療, 隨時間延長而療效提高。在阿德福韋酯聯合葉下珠治療組中, 24周時, 拉米夫定耐藥的HBeAg陽性慢性乙型肝炎病毒應答率為68%, 生化應答率為74%, HBeAg陰轉率為38%, HBe轉換率為21%, 均較單用阿德福韋酯為高, 特別是HBeAg陰轉及HBe轉換差別較大, 但經統計學處理無顯著意義, 可能與例數較少有關。而48周其病毒應答率為85%, 生化應答率為91%, HBeAg陰轉率56%, HBe轉換率為38%, 與單用阿德福韋酯組比較差異均有顯著性(P

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篇7

【關鍵詞】 慢性乙型肝炎；拉米夫定；療效；藥理

文章編號：1004-7484（2013）-12-7529-02

慢性乙型肝炎是由HBV引起的世界性傳染性疾病，我國作為乙型肝炎的重災區，人民群眾安全及健康受到嚴重威脅。乙型肝炎發病較緩，主要表現為亞臨床型及慢性型。其中慢性型乙型肝炎最為常見，其發病機制較為復雜，因此臨床救治難度較大，臨床多采用高強度抗病毒藥物，拉米夫定作為抗病毒的有效藥物已經成為慢性乙型肝炎治療的首選藥物，近年來，關于拉米夫定在慢性乙型肝炎治療應用中的研究逐漸增加，對這些研究進行總結分析，對更好的了解拉米夫定治療慢性乙型肝炎的療效及藥理作用有著重要作用。

1 慢性乙型肝炎臨床特點及發病機制

慢性乙型肝炎僅有1/3有肝損害臨床表現，主要通過母嬰、血液及性接觸傳播。臨床醫學判斷乙型肝炎主要通過生化學試驗、臨床及輔助檢查等確診，HBeAg陽性慢性乙型肝炎血清HBsAg、HBV DNA和HBeAg陽性，抗-HBe陰性，血清ALT持續或反復升高，或者肝組織學檢查出現肝炎病變為慢性乙型肝炎[1]。慢性乙型肝炎臨床癥狀主要由慢性活動性肝炎及慢性遷延性肝炎，其中慢性活動性肝炎主要由慢性遷延性肝炎發展來。慢性乙型肝炎患者肝部出現明顯的匯管區炎癥，淋巴細胞及少數巨噬細胞、漿細胞受到炎癥浸潤，并聚集引起匯管區擴大，對界板進行破壞，繼發界面肝炎[2]。界面肝炎及匯管區炎癥是慢性乙型肝炎病變活動及進展的特征性病變，小葉內肝細胞出現變性、橋形壞死及融合性壞死等，且隨著患者病情的加重更加明顯，慢性乙型肝炎患者肝內膠原沉積過度，從而導致纖維間隔及肝纖維化的形成，病情進一步加重時，可導致肝小葉結構的紊亂，從而形成假小葉并發展為肝硬化[3]。

免疫組織化學法檢測下可見患者肝細胞內是否存在HBcAg表達或HBsAg，出現HBcAg胞膜型及胞漿型表達，同時HBsAg為胞膜型或者胞漿彌漫型則說明HBV復制活躍，若出現HBcAg核型及HBsAg包涵體型則說明肝細胞內存在乙型肝炎病毒[4]。

2 拉米夫定

拉米夫定是核苷類似物的抗病毒藥物，能夠有效抑制病毒DNA鏈的合成及延長。臨床研究結果顯示拉米夫定能夠有效抑制體外及實驗性感染動物體內的HBV病毒[5]。拉米夫定中的拉米夫定三磷酸鹽在口服時滲入病毒DNA中，對病毒DNA的合成形成阻礙作用，同時拉米夫定三磷酸鹽不會對正常細胞脫氧核苷的代謝形成影響。臨床研究表明，拉米夫定三磷酸鹽在哺乳類動物的使用中，對DNA聚合酶α和β抑制作用極弱，幾乎不會對哺乳動物細胞DNA含量產生任何影響，同時拉米夫定長期使用可有效緩解肝臟壞死炎癥性的改變，從而對肝臟纖維化的進一步發展形成阻礙作用[6]。

3 拉米夫定在慢性乙型肝炎治療中應用研究

鐘秋明[7]在對48例慢性乙型肝炎患者進行研究時，將患者分為觀察組與參考組，觀察組患者采用拉米夫定治療，參考組患者采用通抗病毒保肝藥物治療，兩組患者均治療15個月后，觀察組患者尿常規、血常規、腎功、肝功、兩對半、凝血酶原時間、HBeAg、HBV-DNA均明顯高于參考組，觀察組患者治療總有效率為83.3%，參考組患者治療總有效率為41.7%，P

4 拉米夫定治療乙型肝炎藥理作用

拉米夫定進入人體內后生成拉米夫定三磷酸鹽，能夠參與乙型肝炎病毒聚合酶的競爭性抑制，同時與脫氧胞嘧啶核苷酸進行競爭，通過滲入病毒DNA連，組織其延伸及復制[11]。拉米夫定能夠促使血清轉氨酶恢復正常，可明顯改善肝臟壞死炎癥，組織肝臟纖維化的發展，起到良好效果，然而藥物長期使用，患者會逐漸產生耐藥性，這是由于YMDD突然轉變為YIDD或YVDD，從而導致藥物療效降低，目前關于突變發生機制尚不明確，然而可增加M204V對拉米夫定的耐藥性。臨床研究結果顯示，相較野生株HBV，單獨的M204V變異株對拉米夫定敏感度明顯降低，約為1/150，而發生L180M/M204V雙株病變對拉米夫定的敏感度降至1/80000[12]。變異一般發生在拉米夫定治療6個月后，同時變異發生率隨著治療時間的延長而增加。對于出現耐藥的患者，若ATL及HBV-DNA水平相較治療前較低時，繼續采用拉米夫定治療，出現免疫抑制或無肝硬化基礎患者則停止拉米夫定治療，采用其他藥物單獨或聯合治療。

5 結束語

慢性乙型肝炎是進展性損害疾病，臨床醫學認為在慢性乙型肝炎的治療中主要采用強抗病毒藥物，拉米夫定作為首個在臨床推廣使用的核苷類藥物，能夠有效抑制病毒復制，同時對肝臟無明顯毒副作用，因此具有顯著的臨床效果，然而拉米夫定在治療慢性乙型肝炎治療時，會導致較強耐藥性出現，導致藥物治療長期療效較差，因此如何從根本上治療乙型肝炎病毒尚需醫療人員進行進一步研究。

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篇8

山東省棗莊市中醫醫院藥劑科，山東棗莊 277000

[摘要] 目的 探討阿德福韋酯聯合拉米夫定治療拉米夫定耐藥HBeAg(+)慢性乙型肝炎初治患者的臨床療效。方法 將60例拉米夫定耐藥的慢性乙型肝炎患者隨機分成兩組，觀察組采用阿德福韋酯和拉米夫定聯合治療，對照組單獨阿德福韋酯治療。測定兩組治療前和治療后48 周的病毒核糖核酸定量(HBV DNA)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、血肌酐( SCr)水平及HBeAg轉陰率。 結果 治療24周后，觀察組的總有效率（96.7%）明顯高于對照組（80.0%），差異有統計學意義（P<0.05）；觀察組ALT、AST、SCr、HBV-DNA 值均較治療前顯著降低（P<0.05或P<0.01）；觀察組HbeAg轉陰率顯著高與對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 阿德福韋酯聯合拉米夫定對拉米夫定耐藥的慢性乙型肝炎患者療效顯著，可顯著改善患者的相關肝功能指標，抑制病毒復制，提高HBeAg轉陰率，聯合用藥效果優于單獨應用阿德福韋酯治療。

關鍵詞 阿德福韋酯；拉米夫定；慢性乙型肝炎；耐藥性

[中圖分類號] R512[文獻標識碼] A[文章編號] 1674-0742（2014）08（a）－0101-02

[作者簡介] 張慶霞（1971-），女，山東棗莊人，本科，主管藥師，主要從事臨床藥學工作。

WHO報道數據顯示，全世界每年約有100 萬人死于乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝炎、肝硬化和肝癌等慢性肝疾病[1]。我國屬乙肝病毒高感染區， 慢性乙型肝炎病毒感染是我國慢性肝病最主要的病因。雖然臨床上抗乙肝病毒的藥物不斷更新，但其更新速度仍遠遠低于病毒對藥物的耐藥變異速度，因此，乙肝病毒的耐藥性是目前臨床治療慢性乙型肝炎面臨的棘手問題。拉米夫定作為臨床常用的抗病毒藥物，但由于長時間使用，其病毒耐藥突變的發生率較高，而限制了其臨床單獨應用。研究表明[2]聯合用藥可以降低病毒耐藥的發生率，提高抗病毒效果，為探討阿德福韋酯聯合拉米夫定治療拉米夫定耐藥HBeAg(+)慢性乙型肝炎初治患者的臨床療效，該院對2012年1月—2013年4月期間該院收治的拉米夫定耐藥的乙型肝炎患者給予阿德福韋酯和拉米夫定聯合治療，觀察期臨床療效，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇在該院肝病科住院治療的60例HBeAg(+)慢性乙型肝炎患者納入該研究，所有入組病例均符合中華中醫藥學會《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標準[3]，且符合以下納入標準：①經拉夫米定治療至少6個月后出現耐藥性；②6 個月內使用過干擾素、細胞毒藥物、免疫調節劑；③排除合并感染HIV、HCV、HDV者及合并酒精性肝炎、自身免疫性肝炎者。將60例患者隨機分為觀察組（采用阿德福韋酯和拉米夫定聯合治療）和對照組（單獨采用阿德福韋酯治療），每組30例。觀察組男性21例，女性9例，年齡25~56歲，平均（43.1±6.4）歲；對照組男性20例，女性10例，年齡26~55歲，平均（42.9±6.2）歲。

1.2 治療方法

兩組患者均給予常規保肝及對癥治療，包括抗病毒、保肝抗炎、免疫調節、對癥治療等。同時口服拉米夫定片（賀普丁，國藥準字H20030581），100 mg/d， 1次/d；觀察組患者同時給予阿德福韋酯片（賀維力，國藥準字H20050651）口服治療，10 mg/d，1次/d。兩組均連續治療12個月。

1.3 檢測指標及方法

分別檢測兩組患者治療前和治療后48周的HBV DNA 、ALT、AST、SCr值及HBeAg轉陰率。HBV DNA的檢測采用定量PCR法，其值＜500 copies/mL 為陰性；采用Reflotron plus 快速全自動干式生化分析儀檢測血清ALT、AST、SCr值。

1.4 療效判定標準

參照文獻[4]，根據患者的肝功能指標、病毒指標及臨床癥狀判斷臨床療效。完全有效：ALT、AST、SCr等各項肝功能指標均恢復正常水平，HBeAg 、HBVDNA轉陰；部分有效：ALT、AST、SCr等各項肝功能指標下降80% 以上，主要臨床癥狀、體征明顯改善，HBV-DNA 定量下降。無效：各項肝功能指標及HBV-DNA 定量未達到上述標準。有效=完全有效＋部分有效。

1.5 統計方法

采用spss16.0統計軟件對研究數據統計分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，組間及組內比較采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，檢驗水準取α=0.05。

2 結果

2.1 兩組臨床療效比較

經χ2檢驗，觀察組的總有效率（96.7%）明顯高于對照組（80.0%），差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 兩組療效指標比較

治療后，觀察組ALT、AST、SCr、HBV-DNA 值均較治療前顯著降低，差異有統計學意義（P<0.05或P<0.01），而對照組以上血清學指標雖較治療前下降，但差異無統計學意義（P>0.05）；觀察組HbeAg轉陰率顯著高與對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 兩組不良反應情況比較

治療期間兩組患者均未出現嚴重藥物相關性不良反應，觀察組出現白細胞減少1例，脫發1例；對照組出現腹瀉1例，白細胞減少1例。以上不良反應癥狀均較輕微，通過有效的對癥治療和控制后，均未影響患者的治療。

3 討論

拉米夫定是臨床常用的抗乙肝病毒的核苷類藥物，通過抑制DNA 聚合酶的活性阻斷病毒DNA的復制，具有不良反應少、價格低、病毒抑制作用好等優點，但也存在用藥周期長，易出現耐藥性的問題[5]。阿德福韋酯對乙肝病毒DNA的復制具有明顯的抑制作用，并且對HBeAg 陽性，尤其是對拉米夫定耐藥的慢性乙肝患者療效較好，且其耐藥變異率低，特別適合于對拉米夫定耐藥的需要長期藥物治療的患者[6]。其抗病毒機制是將自身整合到病毒DNA復制鏈上，阻斷DNA鏈的延長，從而終止病毒DNA復制；同時，由于雙磷酸阿德福韋的化學結構與脫氧腺苷三磷酸（DNA 聚合酶的自然底物）結構相似，競爭性抑制乙肝病毒DNA聚合酶活性，從而抑制病毒DNA復制。

該院選擇2012年1月—2013年7月收治的60例出現拉夫米定耐藥的慢性乙型肝炎患者為觀察對象，將其中30例采用拉夫米定聯合阿德福韋酯治療，其余30例僅給予阿德福韋酯治療，研究結果顯示：聯合用藥組的臨床有效率達96.7%，明顯優于單獨用藥組；且聯合用藥組的ALT、AST、SCr等血清學指標和HBV-DNA、HbeAg等病毒學指標及相關臨床癥狀均較治療前顯著改善，而單獨阿德福韋治療組的以上指標雖有所改善，但效果不如觀察組明顯。李雋[7]等研究發現，治療24、36、48 周，阿德福韋酯聯合拉米夫定組患者的HBV-DNA轉陰率高于單獨阿德福韋酯治療組，與該研究結果一致 ；Yeon 等[8]研究表明，拉米夫定耐藥的慢性乙肝患者改用阿德福韋酯單藥治療時，也易出現耐藥，耐藥率在第2年可達到25.4%[9]，此項結果也為該研究的開展提供了依據；有報道顯示阿德福韋酯聯合拉米夫定治療慢性乙肝會導致患者SCr升高[3]，而該研究中未見SCr 升高，反而下降，這可能與用藥時間的偏短有關。

通過對該研究結果的分析，同時結合以往文獻報道，對于拉米夫定耐藥的慢性乙型肝炎患者，采用阿德福韋酯聯合拉米夫定治療，可通過不同作用途徑，對乙肝病毒的復制起到多重抑制作用，同時還能降低病毒耐藥性，提高乙肝病毒DNA及HBeAg轉陰率，不良反應較少較輕，是一種安全系數較高、療效確切的用藥方案。該研究也存在樣本量偏少、觀察時間偏段等方面的問題，建議在臨床開展大樣本、長時間的觀察，以便進一步研究該用藥方案的遠期療效和安全性。

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篇9

關鍵詞：乙酰膽堿酯酵素；生物感測器；有機磷農藥

一、生物傳感器

生物傳感器（biosensor）的定義為“使用具特異性的生物分子結合信號轉換器，用以偵測生物體內或生物體外的化學物質或與之起特異交互作用后產生響應的裝置”。目標分析物與生物辨識組件結合，進行生物催化反應，生成的化學物質、熱、光、聲、波等，分別經電極或半導體、熱變電阻器、光子計數器 、聲波檢測器等，使之轉變成電氣信號，再以電子裝置進行檢測及記錄。生物傳感器具備選擇性高、分析速度快、便宜方便、體積小、不需前處理、可連續分析、適合商業化設計等優點，是一種新式的分析技術。

二、農藥簡介

（1）有機磷農藥進入人體的途徑為經口、呼吸及皮膚。農藥進入人體后必須轉移到作用的部位，如：肝、肺、腎或神經系統，且達到一定的量，才會有中毒現象。大部分農藥，都可在三天內由體內酵素作用分解成毒性低的代謝物，而由尿及糞便中排出。反觀在昆蟲體內，以巴拉松為例，經蟲體內酵素作用，會將巴拉松氧化成巴拉奧克松，此對AChE的抑制力高達巴拉松的1000～10000倍，因此呈現殺蟲力。（2）有機磷農藥的殘留，是指農藥依政府認可的使用方法使用后殘留下來的量。因此，在這方面，農委會已制訂農藥殘留監測計劃，并設立監測站，從產地及集貿市場采集蔬菜水果樣品，在上市前進行殘毒分析。

三、乙酰膽堿與乙酰膽堿酯酵素的簡介

乙酰膽堿是生物體內重要的神經傳導物之一，普遍存在副交感神經的神經元中，而以神經元末稍處濃度最高，包括神經元末稍的細胞質中以及突觸接合處的空隙中，都有較高濃度存在。該化合物的主要生理機能為擔任神經傳達的媒介物質，負責兩個神經元之間或是神經元與肌纖維之間的刺激傳達。

3 有機磷農藥偵測實驗和結果

一、實驗

本實驗以有機磷農藥巴拉奧克松為研究對象，將100ppm的巴拉奧克松標準溶液，以真實樣品（100%柳橙汁、葡萄汁）稀釋至所需濃度，再與磷酸鈉緩沖溶液混合，以控制樣品pH值及離子強度。使用CPG反應器時所有樣品皆以0.45m 濾膜及0.2m濾膜過濾之后才進行分析。

果汁的pH值較低，且含較多懸浮物，不易過濾，故將它以0.1MpH=7.0磷酸鈉緩沖溶液（含0.1M KCL ）稀釋十倍；其余水樣則使用0.2M pH=7.0磷酸鈉緩沖溶液（含 0.2M KCL ） 1：1混合。

使用 Nylon-6 tubing 反應器時，因是中空的反應器，故水樣只使用0.45m濾膜將較大顆粒濾掉后，直接與0.2M（含0.2M KCL）磷酸鈉緩沖溶液1：1混合；在果汁部分因懸浮物易將反應器塞住的問題已克服，故不再以pH=7.0磷酸鈉緩沖溶液稀釋十倍，而是使用0.2M （含0.2M KCL ）pH=9.5 磷酸鈉緩沖溶液1：1的混合，以克服大多數果汁pH值過低的問題。

二、結果

利用CPG反應器進行偵測的樣品，使用中空的反應器，Nylon-6 tubing，來避免系統阻塞，增加可偵測的樣品種類，結合Nylon-6tubing反應器進行下列的測試，得到固定化AChE Nylon-6 tubing 反應器結合ChOx/HRP 碳粉電極系統實驗結果。

（1）Nylon-6tubing長度對抑制率的影響

Nylon-6 tubing內部的面積較CPG表面積少很多，因此使用過量的酵素進行固定化，利用tubing長度來控制酵素的unit數。但因反應器愈長，溶液分散的狀況就愈嚴重，因此使用0.1M choline先測出不同長度反應器分散的狀況，并將此因素扣除，得不同長度反應器催化Ach的電流。果然tubing長度愈長，所得電流值愈大，顯示可用tubing長度來控制酵素unit數。針對 Nylon-6 tubing 反應器的活性進行最適化的探討。使用300ppb paraoxon對此不同長度（10cm～250cm）的酵素反應器進行抑制，當反應器長度為50cm時可得最好的抑制效果，而CPG反應器的體積與50cm Nylon-6 tubing 反應器的體積大約相同，故此結果是可以預期的。

（2）固定化電鰻 AChE Nylon-6 tubing 反應器分析巴拉奧克松標準品校正曲線

使用50cm電鰻 AChE 固定化 Nylon-6 tubing 反應器，對不同濃度巴拉奧克松標準品進行分析（ 50ppb ～ 1ppm ），結果顯示，巴拉奧克松濃度在50～300ppb之間具有良好的線性關系（r=0.97），偵測極限為63ppb。此結果與固定化電鰻AChE CPG反應器比較可得較低的偵測極限，顯示在 Nylon-6 tubing 反應器內電鰻AChE受有機磷農藥抑制狀況較好。

（3）固定化電鰻AChE Nylon-6 tubing 反應器分析真實樣品

將自行添加巴拉奧克松的真實水樣，以0.2M（含0.2M KCL）pH7.0的磷酸鈉緩沖溶液進行稀釋，以控制真實水樣的pH值及離子強度。現在使用中空的反應器，克服阻塞問題，故將果汁通過0.45m濾膜之后與0.2M（含0.2M KCL） pH 9.5的磷酸鈉緩沖溶液 1：1 混合，并使用50cm電鰻AChE 固定化之Nylon-6 tubing反應器，對不同來源真實樣品進行偵測，結果皆與標準品相當吻合，且誤差皆在9ppb 以內。經稀釋后的葡萄汁pH=6.99相當接近7.0，故結果與標準品相當接近；但稀釋后的柳橙汁pH=6.55，雖AChE活性未受果汁基質影響，但自行添加標準品后所得結果則有偏低的現象，此與CPG反應器情況相同，AChE在反應器內受抑制程度受到 pH值的影響。故分析真實樣品時需使用不同pH值磷酸鈉緩沖溶液進行稀釋，使達到與標準品相同的情況。

4 結論

由本試驗結果證實，使用固定化AChE反應器，結合不需介質的電流式生物傳感器，已能成功的用來分析水樣中的有機磷農藥，且具有靈敏度高、再現性佳、分析速度快、操作簡單等優點。

篇10

關鍵詞 慢性乙型肝炎 干擾素 拉米夫定 YMDD變異 HBV前S2蛋白

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.02.057

Abstract Object:To study the YMDD mutation of HBV and the change of the HBVpre-S2 protein in the resistant chronic hepatitis B patients treated with interferon combined with lamivudine.Method:Real-time fluorescence quantitative PCR method was applied to detect YMDD mutation in the resistant chronic hepatitis B patients treated with interferon combined with lamivudine.ELISA was used to detect the HBV pre-S2 protein of the drug resistance group and the non-resistant group.Result:There were 66 cases with YMDD mutation after drug resistance,51 cases without mutations,33 cases with wild strains.YIDD mutation were 7 cases,YVDD 8 cases,YMDD/YIDD 12 cases,YMDD/YVDD 17 cases,YMDD/YIDD/YVDD 22 cases in 66 cases with YMDD mutation.There were 32 HBV-S2 positive cases in non-resistant group,while 78 HBV-S2 positive cases in drug resistance(P＜0.05).Conclusion:After drug resistance,YMDD mutation occurred.YMDD mutation rate was 44%,and YMDD/YIDD/YVDD was the primary type.Meanwhile,the expression of HBV-S2 increased.It was suggested that the HBV active replication had emerged again after drug resistance,and YMDD mutation was the primary pathogenesis.

Key Words Chronic Hepatitis B;Interferon;Lamivudine;YMDD mutation;HBV pre-S2 protein

慢性乙型肝炎(CHB)是一種世界廣泛流行、嚴重危害人類健康的傳染病，由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起，可發展為肝硬化、肝癌等嚴重肝臟疾病[1]。

慢性乙型肝炎首選核苷類抗病毒藥物拉米夫定及免疫調節劑干擾素治療已經取得了一定的效果，但單獨應用療效有限，且有一些不良反應，為提高療效，降低耐藥，現臨床多采用聯合用藥[2]，以干擾素聯合拉米夫定應用最多。拉米夫定(Lamivudine)又名賀普汀，是胞嘧啶核苷類藥物，是目前公認的有效而安全的抑制病毒復制的藥物，服用方便，不良反應少，易為患者接受[3]。拉米夫定作為第一個獲批準的口服抗HBV藥物，其問世推動了慢性乙型肝炎治療的進程，但長期使用可誘發HBV病毒變異，引起病毒耐藥，導致拉米夫定失去抑制HBV復制作用，從而逐漸產生臨床常見的HBV拉米夫定耐藥，并且隨著用藥時間的延長，耐藥的幾率也相應的增加[4]。干擾素(IFN)是人和動物細胞受到適宜的刺激時產生的一種具有較強生物學活性的微量蛋白，人干擾素根據其來源不同可分為α、β和γ三類，其中IFN-α由白細胞產生，它與IFN-β約有25%～30%的同源性，被統稱為Ⅰ型干擾素[5]。α-干擾素(IFN-α)是慢性乙型肝炎抗病毒治療的主要藥物之一，既能抑制病毒復制，又能調節宿主免疫功能，然而仍有部分患者對IFN-α治療療效不滿意或無應答[5]。2008年1月～2010年12月聯合應用干擾素與拉米夫定治療乙型肝炎引發YMDD變異進行檢測，并分別在未耐藥和耐藥后對HBV-S2進行檢測，探討耐藥后HBV YMDD變異情況及HBV膜蛋白前S2(HBV-S2)表達的變化，為臨床檢測HBV耐藥及調整治療提供實驗依據。

資料與方法

一般資料：2008～2010年收治聯合應用干擾素及拉米夫定進行治療的慢性乙型肝炎患者200例，其中男108例，女92例，平均年齡45.2±20.3歲。

納入標準：符合下列條件者納入本研究進行結果分析：①診斷符合2000年西安會議制定的病毒性肝炎防治方案的診斷標準[6]；②無HAV、HCV、HDV、HEV、HIV重疊感染及自身免疫性肝病；③治療開始前未用干擾素及拉米夫定進行治療，應用干擾素及拉米夫定治療1年后產生耐藥者；④患者了解治療全過程，掌握治療過程中的注意事項，不隨意停藥。

方法：YMDD變異檢測均在患者應用干擾素及拉米夫定治療1年且產生耐藥后進行，HBV-S2的檢測分別在未產生耐藥(服藥前)和產生耐藥后(服藥1年后)進行。①耐藥檢測：采用實時熒光定量PCR法檢測應用干擾素及拉米夫定治療1年的200例慢性乙型肝炎患者HBV-DNA含量的變化，將HBV-DNA拷貝數＞104/ml的患者定為耐藥組。②YMDD變異檢測：采用實時熒光定量PCR法檢測耐藥組HBV YMDD變異情況。操作過程按照試劑盒說明步驟進行(試劑盒購自上海克隆生物科技有限公司)。循環結束后,用LightCycler軟件對結果進行分析。以剛好能區分各曲線為最低標準，得到循環閾值(CT值)，根據CT值判斷陰陽性。CT-c=40 HBV陰性；CT-c＜36且CT-I=40，CT-V=40，YMDD野生型；CT-c＜36且CT-I＜36，CT-V=40，YIDD突變；CT-c＜36且CT-I=40，CT-V＜36，YVDD突變；CT-c＜36且CT-I＜36，CT-V＜36，YIDD/YVDD共生突變。③HBV-S2測定：采用ELISA方法測定HBV-膜蛋白前S2(試劑由上海科華生物工程有限公司提供)。④未產生耐藥組：收集診斷為慢性乙型肝炎患者入院時的血清，按照試劑盒提供的操作步驟進行操作。cut off值＞0.12為陽性。⑤耐藥組：對已產生耐藥的患者進行HBV-S2檢測，方法同前。

統計學處理：采用SPSS13.0統計軟件進行統計學分析。率的比較應用X.2檢驗；P＜0.05表示差異有統計學意義。

結 果

耐藥檢測結果：采用實時熒光定量PCR法檢測應用干擾素及拉米夫定治療1年的200例慢性乙型肝炎患者HBV-DNA拷貝數，將HBV-DNA拷貝數＞104/ml的患者定為耐藥組，計算總體耐藥率為75%，與文獻報告一致[7]。結果見表1。

討 論

乙型肝炎發病率高，全球約有3.5億慢性HBV攜帶者,我國乙型肝炎病毒表面抗原陽性率為9.75%,乙型肝炎患者約3000多萬。但目前尚缺乏特效的治療方法。近年來，臨床多采用聯合用藥，以干擾素聯合拉米夫定應用最多。拉米夫定是常用的核苷類抗乙肝病毒藥物,對乙肝病毒有明顯抑制作用,是目前公認的有效而安全的抑制病毒復制的藥物,它與乙肝病毒多聚酶結合后,競爭性抑制多聚酶活性,使HBV-DNA的鏈合成終止，從而有效地抑制HBV-DNA的復制[8],同時伴有ALT恢復及肝組織病理改善。長期應用拉米夫定(一般療程>6個月以上)病毒將發生變異并導致耐藥，從而使病毒復制重新活躍，甚至病情加重或死亡，其產生耐藥的分子基礎主要為YMDD突變為YVDD或YIDD。YMDD是HBV-DNA P基因C區內的高度保守序列，編碼著HBV多聚酶基因YMDD氨基酸序列(酪氨酸-蛋氨酸-天門冬氨酸-天門冬氨酸)，因此，也是拉米夫定治療HBV的作用靶點[9]。隨著拉米夫定療程的延長，HBV-DNA發生了變異，即高度保守區的YMDD變為YVDD或YIDD。病毒的變異率隨療程的延長而升高。有文獻報道16%～32%的患者用拉米夫定治療1年后發現YMDD突變，并伴隨HBV-DNA和ALT水平上升[10]。本研究檢測干擾素聯合拉米夫定治療1年YMDD的變異率為44%，低于單純拉米夫定治療1年YMDD的變異率，與文獻報道基本一致，認為干擾素可減少或延緩YMDD變異的發生[11]。另外，本研究YMDD的變異以YMDD/YIDD/YVDD變異為主，與前期研究結果一致[12]。

HBV-DNA基因組呈環狀，由一個不完整的雙鏈組成，為部分雙鏈和可變長度的單鏈。目前，發現至少有6個可被轉錄的開放式閱讀框架，即S、P、C、X以及ORF5和ORF6。S基因編碼外膜蛋白，即乙型肝炎表面抗原，S基因區又分為S區，Pre S2區和Pre S1區。由3個位點相同的起始密碼ATG開始分別編碼226個氨基酸的S蛋白、55個氨基酸的pre-S2蛋白和108-119個氨基酸的Pre-S1蛋白[13]。Pre-S2的C端與HBsAg的N端相連，由55個氨基酸組成。Pre-S2暴露于HBV囊膜外層，具有多聚人血清白蛋白(Polymenized Human Serum Albumin，PHSA)的受體(PHSA-R)，能與PHSA結合[14～15]。由于肝細胞表面也有PHSA-R，故HBV能通過血循環中存在PHSA的介導吸附到肝細胞表面，最后經胞飲作用進入肝細胞內。Pre-S2蛋白作為HBV的包膜蛋白之一，在HBV附著和侵入肝細胞的機制中起重要作用，可作為反映HBV復制的指標之一。另據多篇報道[16～17]Pre-S2抗原與HBsAg滴度呈正相關，與HBeAg、PHSAR和HBV-DNA有良好的相關性，而且Pre-S2抗原陽性患者ALT升高的比率明顯高于Pre-S2陰性的患者，二者差異有顯著性，所以HBV Pre-S2抗原與病毒感染、活動性復制、轉歸有密切相關。綜上所述，Pre-S2是判斷HBV感染病毒是否活動和較大傳染性的新的標志，是乙肝早期診斷、療效觀察、預后評估的一個可靠標志。本研究檢測耐藥后HBV前S2抗原陽性率遠遠大于耐藥前(P＜0.05)，說明耐藥后HBV病毒又出現活動性復制。

綜上所述，干擾素聯合拉米夫定治療慢性乙型肝炎產生耐藥后YMDD發生突變，突變率為44%，以YMDD/YIDD/YVDD突變為主，且HBV-S2的表達增加，說明耐藥后HBV病毒出現活動性復制，發生耐藥機制主要為YMDD變異。因此，通過慢性乙肝患者在長時期服用拉米夫定后檢測HBV Pre-S2有助于判斷HBV感染病毒是否活動，這樣便可及時指導臨床重新用藥，調整治療方案，避免延誤病情。

參考文獻

1 丁寧玲,朱翔,王勇平.拉米夫定聯合干擾素治療慢性乙型肝炎的療效觀察［J］.藥物與臨床,2010,7(28):47-48.

2 Terrault NA.Benefits and risks of combination therapy for hepatitis B［J］.Hepatology,2009,49(5 Suppl):S122-128.

3 邱源旺,黃利華,蔣祥虎.慢性乙型肝炎YMDD變異后的治療［J］.世界華人消化雜志,2009,17(29):3034-3037.

4 商慶華,于建國,王永清.拉米夫定治療慢性乙型肝炎YMDD耐藥變異的相關因素分析［J］.實用醫藥雜志,2009,26(3):22-23.

5 徐丙發,范清林,魏偉,等.干擾素及長效干擾素抗肝炎病毒作用機制的研究進展［J］.中國藥理學通報,2008,24(10):1276-1279.