動物行為學的研究方法范文
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篇1
比較行為學是比較醫學的一個分支，是一門多學科、多層次相交叉的邊緣性、綜合性學科，通過本門課程的學習，可以提高學生對人類行為的更深層次的理解和認識，并通過研究動物模型的行為內涵，建立可以評價的行為研究方法與人類行為內涵的比較，進而為人類行為研究提供基礎。比較行為學研究的主要內容包括行為的遺傳學傾向、行為的生理基礎、動物行為特點和研究方法、自發和社會行為研究方法、認知行為研究方法、攝食行為研究方法、阿爾茨海默病動物模型及研究方法、帕金森病動物模型及行為研究方法等。本課程不僅可以開闊學生的視野，增加對生物體行為的了解，也可以為學生進一步學習基礎醫學課程奠定基礎。
2教學概況
吉林醫藥學院面向本科各專業開設了比較行為學選修課，內容涉及行為的遺傳學基礎、嚙齒動物的行為生理學、動物行為特征及研究方法、嚙齒動物的自發與社會行為研究、認知行為研究方法、攝食行為模型與研究方法、運動行為研究方法、跑臺與動物模型運動研究、阿爾茨海默病動物模型及行為分析、精神疾病動物模型及相關行為學研究、帕金森病動物模型和行為研究方法等。選修課和必修課的性質不同，且學生多憑興趣選取，所以在教學方法上可更加靈活多樣，教學中采用多媒體結合視頻的教學形式，且二者占用學時相同，因而更為生動地展現了相關行為學案例，同時教學中結合了課堂討論、課后作業、課前提問等方式，不僅使學生加深理解，又激發了學生的學習興趣，給學生更加深刻的學習氛圍，開闊視野，達到很好的教學效果。課程考核采用作業和平時成績相結合的方式進行。講完相應的知識點，讓學生根據知識點查閱資料，圍繞知識點書寫相關課題的近幾年研究成果，完成作業，回收率達到100%。平時成績主要考察學生平時課堂表現。課程結束后，對課程學習情況等進行問卷調查，了解學生對課程的學習情況以及意見和建議，不斷完善課程教學。
3問卷調查
在課程結束時，對選修本課程的各專業學生進行問卷調查，范圍包括2013級臨床醫學、醫學檢驗、醫學影像、護理學、預防醫學、藥學等本科各專業共124名學生，幾乎涵蓋了所有醫學相關專業；調查內容主要包括選修該課程的原因、課程中印象深刻的內容、期望學習的內容等，期望通過調查能夠了解學生選修這門課程的真正原因、在修習這門課程中的收獲以及對這門課程更高的期望等，從而探討這門課程在醫學相關專業開設的重要性和必要性。發放124份問卷調查表，收回有效問卷117份，有效回收率為94%，調查主要項目內容及結果如下。
1）關于選擇比較行為學課程原因的調查。結果顯示，66%的學生是因為對這門課程感興趣，因好奇而選修的學生占19%，只有5%的學生僅為修學分而選擇該門課程，其他原因占10%。結果表明，多數學生（85%）在選擇這門課程的時候是以興趣愛好為主，說明醫學相關專業學生對這門課程感興趣或者好奇的程度非常高，也間接反映出在醫學相關專業開設這門課程的重要性。
2）關于對印象深刻內容的調查。結果顯示，學生對動物行為特征和人類相關疾病等方面的內容印象較為深刻，分別占到64%和36%，其他（表觀遺傳學等）占4%。提示多數學生對行為學方面的知識以及人類相關疾病方面的學習興趣和效果較好，這些都是學生平時感興趣但沒有機會深入學習的內容，因而在課程結束后對相關內容印象非常深刻。
3）關于對期望學習的內容調查。結果顯示，多數學生期望更多地了解人與人以及人與動物方面行為比較的內容（分別占21%、15%），說明學生在選修這門課程后，期望了解更多相關知識，這也反映出這門課程對學生的意義。從問卷調查結果中發現，醫學相關專業的學生對比較行為學課程感興趣程度非常高，一部分學生對這門課程不了解，因為好奇選擇這門課程，更多的學生對這門課程是充滿興趣的，期望了解相關知識。而經過課程學習后，多數學生對課程內容掌握較好，尤其是關于動物行為和人類相關疾病方面的內容印象更為深刻，這些內容一方面是與生活和專業密切相關的，如自閉癥、帕金森等人類相關疾病，另一方面學生對動物行為感興趣程度很高，因此，學過之后印象極為深刻。而且多數學生對比較行為學課程內容提出一些新的要求和期望，也表明學生在學習過后，不僅了解和掌握了這門課程相關內容，而且期望學習更多，體現出很強的求知欲，而這種興趣和求知欲正是學生在醫學課程學習中最為缺乏的，也是醫學教學改革中期望激發的。隨著基礎醫學發展進步，各學科的知識不斷擴張，學科之間的相互交叉不斷衍生大量邊緣學科和綜合學科。比較行為學作為一門多學科、多層次相交叉的邊緣性、綜合性學科，與行為學、解剖學、遺傳學、生理學、藥理學、病理生理學、醫學機能學、臨床醫學等有很深的關聯性，能將基礎醫學教學中的很多學科聯系在一起，從而加深學生對基礎醫學各學科的學習欲望，這正是這門課程開設的重要作用。
4意義
比較行為學與醫學專業學生的基礎課和專業課的學習關系密切，通過比較行為學的學習，可以幫助學生更加深層次地理解醫學課程。如行為與遺傳學密切關聯，比較行為學可以幫助學生了解基因如何影響和控制行為；行為學與解剖學及生理學相關，每一個物種都會不斷接受來自環境的各種刺激，為了生存和繁衍，必須具有可接受各種信息的感受器，還需靠效應器和內分泌系統對外界刺激做出適當的反應，通過比較行為學的學習，可以加深對解剖結構及相應生理學知識的理解；行為學與藥理學、病理生理學及醫學機能學有關聯性，比較行為學研究中常用的各種動物模型，包括學習記憶相關的疾病動物模型如瞬膜條件反射模型、創傷性腦損傷動物模型、腦缺血模型、老年癡呆模型、帕金森病動物模型制備等，這些都需要藥理學、病理生理學及醫學機能學知識為支撐。在模型制備的基礎上，還可以引導學生學習一些機能學實驗，如研究學習記憶行為學的迷宮（Morris水迷宮、T型迷宮、放射狀或輻射狀迷宮、Barnes迷宮、高架十字迷宮）、場景性和提示性恐懼條件反射、被動和主動回避實驗、物體識別實驗、條件性厭食癥、瞬膜條件反射、嗅覺任務實驗及種群識別等實驗。為適應21世紀醫學科學和衛生事業發展的要求，很多高校陸續開展以器官系統為中心的課程教改模式，比較行為學作為各學科交叉的綜合性學科，有利于基礎與臨床學科內容之間的結合，有利于提高基礎醫學課程之間的內在關聯，有利于學生豐富知識與提高能力。
5結語
篇2
[關鍵詞] 二至百合濃縮膏；抗焦慮；雌性大鼠；去勢；高架十字迷宮；明暗箱
[中圖分類號] R363 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）12-20-03
更年期綜合征是婦女在這一時期由于雌激素水平下降所致的以機體內分泌失調、植物神經系統功能紊亂為主，伴有神經心理癥狀的一組癥候群。二至百合組方中包含女貞子、旱蓮草、百合、知母、牡蠣等中藥組成成分，具有滋陰潛陽，退熱安神之功效。主要用于婦女更年期初期，證見陰虛陽亢，陰虛發熱，骨蒸潮熱，焦慮煩躁，失眠多夢者。本實驗通過雌性大鼠雙側卵巢祛除術復制大鼠更年期綜合征模型，觀察二至百合方對模型大鼠焦慮行為學指標的影響，初步評價藥物的改善更年期焦慮作用。
1 資料與方法
1.1 藥品及試劑
二至百合濃縮膏，北京中研同仁堂醫藥研發有限公司（批號20120902）。
1.2 實驗動物
Wistar大鼠，75只，雌性，體重（200±20）g，SPF級，購自中國人民軍事科學院實驗動物中心。許可證編號：SCXK-（軍）2007-004。
1.3 儀器
海爾BCD-257SL冷藏冷凍冰箱：青島海爾股份有限公司；Sartorious BT 124S電子精密天平：賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；明暗穿梭箱、高架十字迷宮、高架十字迷宮實驗視頻分析系統、SLY-ETS小動物行為活動記錄分析系統，均由北京碩林苑科技有限公司生產。
1.4 方法
1.4.1 動物模型制備與分組 在適應性飼養5 d后，將75只大鼠隨機分為5組，分別為：假手術空白組，模型組，二至百合高劑量（1.92 g濃縮膏/kg）、中劑量（0.96 g濃縮膏/kg）、低劑量（0.48 g濃縮膏/kg）組，每組15只。
模型組及受試樣品3個劑量組制備雌性去勢大鼠（雙側卵巢切除術）模型[1-2]：大鼠0.1%戊巴比妥鈉0.5 mL/100 g體重（50 mg/kg）腹腔注射麻醉。麻醉大鼠取俯臥位，在背部中1/3處剪毛、備皮，碘伏常規消毒。自腰椎沿背部正中線向下做縱行切口約2～3 cm，切開皮膚，沿肩胛線分別于左右兩肋下剪開腰肌，暴露出卵巢及緊密相連的子宮，在子宮角上做兩個結扎，結扎后切斷，將卵巢摘除，縫合皮膚。術后連續腹腔注射72萬U/kg青霉素，以防感染，1次/d，連續3 d。術后第3天開始給大鼠陰道涂片觀察，連續5 d，每天1次，以確定卵巢完全切除。實驗動物從術后的第5天起全部進入動情間期，但動物不再出現動情前期，動情期的雌激素變化，動物基本上符合“更年期”表現。假手術空白組大鼠除不行卵巢摘除外，其余步驟同模型組。
造模后9 d，除假手術空白組和模型組給予等體積蒸餾水外，其余各組開始灌胃給藥，每日1次，連續45 d后分別進行高架十字迷宮和明暗箱行為學實驗測試（先開展高架十字迷宮實驗，其后間隔1周后開展明暗箱實驗）。
1.4.2 大鼠高架十字迷宮實驗 末次給藥30 min后，進行高架十字迷宮行為學的測評。實驗開始時，將大鼠放入高架十字迷宮中央，頭朝開臂，觀察5 min內大鼠的活動情況[3-5]。觀察并記錄以下各項指標：進入開臂次數，進入閉臂次數，以及在兩臂的滯留時間。分別計算大鼠進入開臂的時間占總時間（開臂和閉臂滯留的時間之和）的百分比（open arm time percent，OT%），以及大鼠進入開臂的次數占總次數（開臂與閉臂之和）的百分比（open arm entry percent，OE%）。觀察時以大鼠四爪均進入開臂或閉臂為準。
1.4.3 大鼠明暗箱實驗 末次給藥30 min后，將大鼠置于明箱中央，背朝通道，觀察5 min內大鼠的活動情況并記錄明暗箱停留時間和穿箱次數。
以上兩種行為學檢測實驗操作時，應保持外界環境安靜，每次放入大鼠前清理干凈箱內的排泄物，盡可能保證每批次檢測的客觀性。
1.5 統計學處理
采用SPSS13.0統計軟件進行統計處理，數據以（）表示，數據先進行方差齊性檢驗。方差齊選用One-Way ANOVA法進行各組間比較；方差不齊選用t檢驗進行組間比較。
2 結果
2.1 二至百合濃縮膏對去勢大鼠高架十字迷宮行為活動的影響
實驗結果顯示，模型組組大鼠與假手術空白組比較，OE%和OT%顯著減小（均P
2.2 二至百合濃縮膏對去勢大鼠明暗箱穿梭行為的影響
研究結果顯示，模型組大鼠明箱停留時間和穿箱次數均顯著降低，與假手術空白組比較差異有統計學意義（分別P
3 討論
更年期綜合征[6]屬于中醫學“絕經前后諸癥”范疇，歷代文獻關于本病的論述散見于“臟躁”“心悸”“失眠”“眩暈”“頭痛”“郁證”等病癥中。絕經前后腎臟虛損，腎氣漸衰，耗傷，陰陽平衡失調，臟腑功能紊亂而出現絕經前后諸癥證候[7]。隨著我國人口結構不斷老齡化和社會競爭日益激烈，不良的工作環境、家庭關系緊張及精神等因素影響，婦女進入更年期逐漸增加、年齡提早，從而使更年期焦慮癥的發病率亦明顯增加[8]。因此治療和緩解更年期綜合征焦慮癥具有重要的社會意義。
二至百合方由經典方劑“二至丸”和“百合知母湯”合方加減而成，具有滋陰潛陽，退熱安神之功效。本研究主要通過雌性大鼠卵巢祛除術復制大鼠更年期綜合征模型，進而采用高架十字迷宮和明暗箱實驗觀察二至百合方對模型大鼠焦慮行為學的影響，評價處方的改善更年期綜合征焦慮作用。
高架十字迷宮模型，為抗焦慮研究中公認的非條件反射模型，是抗焦慮研究中應用最廣泛的模型之一[9]。它利用動物對新異環境的探究特性相對高懸敞開臂的恐懼心理，形成動物的矛盾行為，進入開放臂的百分數（OE%）和在開放臂停留時間的百分數（OT%）反映的是動物趨近規避沖突的結果，與焦慮程度直接相關。通常抗焦慮藥只增加動物對開放臂的探索，使OE%和OT%上升。開放臂和封閉臂總進入次數反映了動物總的運動能力，可用來觀察藥物有無鎮靜作用及鎮靜強度。被保護區的活動性一定程度上與抗焦慮劑的效應相關[10]焦慮動物的OE%和OT%明顯降低，經典抗焦慮藥物則使兩者升高[11]；明暗箱行為實驗[12-13]中，明箱活動時間越長，探洞和穿梭次數越多，反映實驗動物對新環境的探索欲望水平越高，探索欲越強則代表環境適應能力越強，焦慮水平越低。
本實驗以去勢大鼠造成更年期模型，考慮動物行為檢測的個體差異可能比較大，所以本實驗選用了較為經典的2種焦慮行為檢測方法進行二至百合膠囊的抗焦慮實驗。本研究表明，高架十字迷宮實驗中，與假手術空白組比較，去勢大鼠進入開閉時間和次數的百分率顯著下降，在明暗箱實驗中，與假手術空白對照組比較，去勢大鼠在明箱停留時間明顯縮短，穿箱次數明顯減少。由此提示，去勢動物處于焦慮狀態。高架十字迷宮實驗中，二至百合濃縮膏3個劑量組均可增加去勢大鼠OE%和OT%值，與模型組比較，中劑量組OE%和OT%值有明顯的統計學意義（P
根據相關文獻報道含有百合[14-15]、知母[16-17]等藥物組方在臨床上對更年期綜合征具有明顯治療作用，有實驗表明含有女貞子[18]的復方藥物連續灌胃可明顯降低更年期大鼠血清促性腺激素FSH含量，對血清E2含量有顯著增加作用，使更年期陰虛內熱、煩躁不安、失眠等癥狀得以緩解。
本實驗研究結果表明二至百合方對更年期焦慮癥狀有明顯改善，對更年期綜合征有一定的緩解作用，但是二至百合方改善更年期綜合征模型大鼠焦慮行為學的作用機理有待進一步深入研究。
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篇3
【摘要】 目的 觀察補腎化痰法對AD模型大鼠行為學的影響并探討其可能機制。方法 應用腦立體定向技術給大鼠BNM注射凝聚態Aβ2535＋IBO構建AD模型。注射2周后，高、中、低量組分別給大鼠該藥水煎液灌胃；西藥組用哈伯因混懸液灌胃；正常組、空白組、模型組均給予等容積的生理鹽水灌胃。28 d后采用Morris 水迷宮進行行為學評價。結果 行為學結果顯示高、中、低量組和西藥組的平均潛伏期較模型組有明顯縮短（P
【關鍵詞】 補腎化痰法； Alzheimer； 行為學
【Abstract】 Objective To observe effects and function mechanism of replenishing kidneyessence and removing phlegm therapy on behavior in the rat of AD.Methods Application of technology to stereotactic brain of rats injected BNM condensed Aβ2535 + IBO build AD model. 2 weeks after injection， high， medium and low volume of the rats were administered the drug decoction; western medicine group with Huperzine oral suspension; normal group， blank group， model group were given equal volume of normal saline ig. 28 days after the Morris water maze used for behavioral evaluation.Results Behavioral results showed high， medium and low volume group and western medicine group than the average incubation period of the model group was significantly shorter (P
【Key words】 replenishing kidneyessence and removing phlegm therapy; Alzheimer; behavior
阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種以進行性記憶障礙和智能衰退為主要臨床特征的中樞神經系統退行性疾病，隨著人口老齡化的日趨嚴重，AD已經成為危害老年人健康的主要疾病之一［1］，是目前公認具有世界性的公共衛生事業重大問題，被稱為“即將到來的21世紀的瘟疫”［2，3］。目前AD病因和病理機制尚未完全明了，更無確切療效的藥物。尋找確能根治AD藥物已成為當今國際熱點課題之一。
目前西醫主要是對癥治療，治療的目的是延緩AD的進展和促進神經元的功能恢復以改善癥狀。治療的策略是根據現有損害神經元的各種因素或AD腦中代謝異常來設計不同作用位點的各種藥物，但是這些藥物價格昂貴，毒副作用較大，不能支持老年人用藥的要求［4，5］。中醫藥在延緩衰老以及衰老相關疾病的防治方面有著豐富的理論和實踐經驗，以其療效較好、綜合效益高、副作用少而顯示了良好的前景。為此，我們首先建立了大鼠AD模型，并采用Morris 水迷宮進行行為學測試，觀察補腎化痰法對AD模型大鼠行為學的影響，并用哈伯因混懸液作對照，旨在進一步探討中藥治療AD的作用及機理。
1 實驗材料
1.1 動物
15月齡Wistar大鼠70只，雌雄各半，體重450±50 g，由湖北省實驗動物研究中心提供。
1.2 主要試劑
Aβ2535和IBO購于Sigma公司。
1.3 主要儀器和設備
Morris水迷宮裝置（中國醫學科學院），腦立體定位儀（北京碩林苑科技有限公司），微量注射器 1 μl（上海醫用激光儀器廠），電子天平（AL104，梅特勒托利多公司）。
1.4 藥物
補腎化痰方由制首烏、石菖蒲、竹節參、茯苓、陳皮、半夏、白芥子等組成，購自湖北中醫學院國醫堂門診部。中藥經水煎制成濃縮液。哈伯因，購自河南眾生制藥股份有限公司豫中制藥廠，批號:060321.
2 實驗方法
2.1 動物分組
①Aβ2535+IBO模型組（簡稱模型組），②假手術組（簡稱空白組），③正常組， ④哈伯因治療組（簡稱西藥組），⑤補腎化痰法高劑量組（簡稱高量組），⑥補腎化痰法中劑量組（簡稱中量組），⑦補腎化痰法低劑量組（簡稱低量組）。
2.2 AD模型構建
模型組大鼠用2 ％戊巴比妥鈉（40 mg/kg）腹腔注射麻醉后，固定于腦立體定位儀上，顱頂正中切開暴露至顱骨，根據大鼠顱腦立體定位圖譜，對基底核立體定位（位置:前囟后 3.8 mm，中線旁開 2.5 mm，深度 3 mm），用牙科鉆鉆開顱骨，用1 μl 微型進樣器注射針5 min 內緩慢注入Aβ2535+IBO混合液 1 μl，留針10 min.注射完畢后以局部軟組織封閉針孔，縫合皮膚。術后給予青霉素鈉鹽 5 萬單位肌注，每天1次，連續 3 d.空白組在定位下給予大鼠BNM一次性注射 1 μl 滅菌生理鹽水。
2.3 給藥
腦內注射2周后給藥。給藥量均按人與大鼠體表面積系數比確定，以臨床人用藥等效劑量為中劑量，模型組、空白組、正常組給予生理鹽水灌胃，1 ml/100 g·d，連續28 d.西藥組給予哈伯因混懸液灌胃，1 ml/100 g·d，連續28 d.高量組、中量組、低量組分別給予補腎化痰方水煎液灌胃，含生藥分別是2 g/ml，1 g/ml，0.5 g/ml，1 ml/100 g·d，連續28 d.
2.4 檢測指標及方法
2.4.1 Morris水迷宮實驗 造模結束后進行Morris水迷宮行為檢測，評價其學習記憶成績。主要進行定位航行和空間探索實驗。
2.4.1.1 定位航行實驗 定位航行實驗用于測量大鼠通過一段訓練后，對空間的學習記憶能力。每日上下午各4次，將大鼠面向池壁分4個象限放入水中，記錄其在2 min內尋找到平臺的時間（逃避潛伏期）。如果大鼠在2 min內未找到平臺，則用手牽引其至平臺上，讓大鼠停留10 s，計算機會自動記錄大鼠在實驗期間的行程，并轉換為行程轉跡圖，所經過長度、所需的時間，每個象限的行程長度、每個象限行程的時間、速度、各個象限的行程長度占總長度的百分比，各個象限的行程時間占總時間的百分比。數據的采集和處理由Morris迷宮圖像自動監視處理系統完成，歷時4 d.
2.4.1.2 空間探索實驗 5 d撤除平臺，進行空間探索實驗。將大鼠任選1個入水點放入水中，記錄其2 min內跨越原平臺位置的次數。
兩實驗還記錄大鼠在平臺象限的游泳距離占總距離百分比，池壁20 %和40 %區域游泳距離百分比，以判斷動物記憶儲存及再提取能力。
2.5 統計處理
所有計量檢測結果以均數±標準差（±s）表示。采用SPSS FOR WINDOWS 15.0統計軟件包統計分析。
3 結果
3.1 大鼠平均逃避潛伏期
在實驗前兩天，各組動物基本圍繞池壁游泳，較少游向平臺附近，其運動軌跡呈隨機分布于各象限之中。但隨著實驗的推進，正常組、空白組大鼠依靠空間線索找到平臺位置的時間逐漸縮短，其運動軌跡也慢慢位于平臺象限，或者在平臺象限相鄰兩側的象限尋找，其潛伏期迅速下降。但模型組大鼠除極少數能找到平臺外，基本保持前兩天時的情形，稍有改善。為分析信息獲取能力，測量了4 d訓練的總潛伏期和訓練末2 d的后潛伏期。從表1可知，模型組平均潛伏期比正常組和空白組明顯延長，有統計學意義（P
3.2 大鼠平均游泳距離
定位航行實驗中，觀察了實驗大鼠在實驗平臺象限的游泳距離占總距離百分比，池壁20 %和40 %區域游泳距離百分比（分別簡稱象限百分比、20 %區域、40 %區域）(見表2)。從表中可見，模型組大鼠游泳的象限百分比較正常組和空白組大鼠明顯縮短。高、中量組的象限百分比較模型組有明顯提高（P0.05)。進一步的組間比較發現低量組與西藥組的差異具有統計學意義（P0.05)。低量組20 %、40 %區域與西藥組比較有統計學意義（P
3.3 大鼠搜索平臺變化趨勢
大鼠在尋找平臺的過程中表現出不同方式，一些大鼠進入水池后無目的游動，往往速度較快，但經常找不到平臺；還有一些大鼠經過幾次訓練后，對環境的記憶已經非常深刻，一入水直接游向平臺；更多的大鼠在學習過程中總是注意觀察周圍的環境，并識別水池內壁的不同圖形標志，根據標志與平臺的相對位置去尋找平臺，這些大鼠總是先游到某一特定的象限，看到標志后又到平臺。從表3中可看出，模型組大鼠空間搜索能力顯著下降，其象限百分比較正常組和空白組明顯縮短（P
3.4 大鼠跨越平臺的次數
對各組大鼠跨越原平臺位置的次數進行了比較，從表4中可看出，模型組大鼠較正常組和空白組大鼠跨越原平臺位置次數明顯下降，有統計學意義（P
4 討論
AD早期表現主要是健忘，并伴有其他高級功能的障礙，學習記憶障礙是AD患者一個重要的臨床癥狀和特征。AD最早和最重要的癥狀之一是比較突出的近期記憶受損［6］。
Aβ2535和IBO腦內注射可以很好地模擬AD行為學和病理學表現，但仍缺乏深入的行為學研究，作者用Morris水迷宮行為評價該模型的行為學特征具有重要意義。Morris水迷宮實驗能夠較準確地反映動物的學習記憶能力，可作為檢測實驗動物學習記憶水平的重要工具。Morris水迷宮所檢測的是大鼠在多次的訓練中，學會尋找固定位置的隱藏平臺，形成穩定的空間位置認知，這種空間認知是加工空間信息（外部線索）形成的，所形成的記憶是一種空間參考記憶。從信息的加工和提取方式來看，這種空間參考記憶進入意識系統，其儲存的機制主要涉及邊緣系統（如海馬）以及大腦皮層有關腦區，屬于陳述性記憶。而臨床健忘和癡呆的患者，正是陳述性記憶首先受損，而且比較突出。所以從檢測的記憶屬性來說，運用Morris水迷宮行防治此類疾病有效藥物的篩選研究比較恰當。通過比較前幾天的訓練情況，可以獲得動物獲取空間信息的能力和學習的能力，而探索實驗可以判斷動物記憶儲存能力及提取再現能力。
本實驗采用凝聚態的Aβ2535和IBO直接注射大鼠BNM建立AD模型，2周后用水迷宮觀察了大鼠學習記憶的變化［7～9］。在水迷宮實驗中，隨著學習次數的增加，各組大鼠逃避潛伏期和游泳距離逐漸縮短，說明各組大鼠在4 d游泳訓練中對于尋找平臺均有一定的學習記憶能力。但是，不同組之間改變顯著不同，表現了大鼠不同的學習記憶能力。模型組在水中游泳尋找平臺的潛伏期明顯高于正常組和空白組；隨著訓練時間的延長，模型組大鼠找到平臺的時間逐漸縮短，縮短的幅度較正常組和空白組均小。在平臺的停留位置亦少于正常組和空白組。對大鼠在尋找平臺過程中表現出的不同方式比較發現，正常組大鼠往往采取直接游向平臺，或者根據水池壁標志尋找平臺的方式較快地找到平臺，表明這些大鼠對環境的記憶已經非常深刻，空間定向能力好，而模型組大鼠進入水池后無目的地游動，經常找不到平臺。從大鼠定位航行實驗、空間搜索實驗、跨越原平臺位置次數實驗的結果顯示，該模型具有認知功能障礙。通過補腎化痰法和哈伯因干預，補腎化痰法高、中、低量組和西藥組較模型組大鼠逃避潛伏期縮短，跨越原平臺次數增加，表明補腎化痰法對AD模型大鼠的學習記憶障礙有改善作用。
AD屬中醫學的呆病、郁證、文癡等范疇，以本虛標實為主要特征，本虛在于腎的精氣不足，標實在于痰濁，一方面腎虛為主的臟腑功能失調可導致痰濁的產生，即因虛致實，另一方面，痰濁為患又可影響氣血津液的化生和運行，致本虛更甚，即因實而致虛，兩者互為因果，形成惡性循環，以致病程纏綿，見癥多端，所以本病以補腎化痰為基本治法［10，11］。
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篇4
【關鍵詞】 益智寧神口服液/藥理學;抽動—穢語綜合征/中藥療法;神經遞質;疾病模型，動物;大鼠;色譜法，高壓液相
抽動—穢語綜合征(Tourette syndrome，TS)，又稱多發性抽動癥，是一種兒童期發病的慢性神經精神障礙性疾病。臨床表現主要為突然、快速、反復、非節律性、不自主和刻板的運動性抽動和發聲性抽動，還可能伴有各種行為紊亂、強迫觀念與行為、認知障礙等，可不同程度地干擾和損害兒童的認知功能，影響社會適應能力。本病病因尚未明確，具有明顯的遺傳傾向，多見于4～12歲的兒童，患病率約為005%～3%，近年來發病呈明顯上升趨勢，男孩多于女孩[1]。廣東省中醫院兒科在臨床實踐中運用自擬方益智寧神口服液治療該病，取得了較好的療效[2]。本實驗應用亞氨基二丙腈腹腔注射建立抽動—穢語綜合征模型大鼠，觀察該藥對模型大鼠行為學和神經生物學的影響，現報道如下。
1材料與方法
11實驗動物SPF級SD大鼠60只，28～30d齡，體質量(250±10)g，雌雄各半。由廣東省醫學實驗動物中心提供(許可證號:粵監證字2008D006，批號：0037766)。
12實驗藥品亞氨基二丙腈(iminodipropionitrile，IDPN)購自Alfa Aesar公司(批號：C7323A)，中藥益智寧神口服液(由廣東省中醫院提供，批號：080201)，對照藥物為氟哌啶醇(上海信誼九福藥業有限公司，批號：08031121)。
13儀器及試劑LC26A 型高效液相色譜儀、SPD26AV 熒光檢測器、C2R4A 數據處理機均為日本島津公司產品，脫水機、包埋機、切片機和生物顯微鏡等設備為德國Leica公司產品，微量組織勻漿器為Millipore公司產品，ZH藍星C/s型腦立體定位儀，高氯酸、乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa2)均為分析純，甲醇為色譜純，對照品由中國藥品生物制品所提供。
14模型復制參考Wakata[3]的方法，將亞氨基二丙腈溶解于生理鹽水，稀釋成濃度100mg/mL，給藥途徑為腹腔注射，劑量為150mg·kg-1·d-1，每天1次，共用7d。
15分組及給藥選用SD大鼠隨機分為4組：空白組和模型組各10只，中藥組和西藥組各20只，每組均雌雄各半。治療組在造模后第2天開始給藥，中藥組按20kg的兒童每天口服20mL益智寧神口服液的比例計算，每只大鼠灌胃約2mL/d;西藥組按20kg的兒童每天口服氟哌啶醇片1mg的比例計算，每只大鼠灌胃約015mg/d，連續14d。
16大鼠行為觀察[4]采用觀察評分，每次至少觀察1h，主要誘發癥狀為運動行為和刻板運動。(1)運動行為評分：0分：安靜或正常活動;1分：能過度興奮;2分：探究行為增加;3分：跑;4分：跑和跳;(2)刻板運動(或定型運動)評分：0分：無刻板運動;1分：旋轉行為;2分：頭和頸部的上下運動過多;3分：頭、頸部的上下運動過多加旋轉行為;4分：頭向側擺合并頭和頸部的上下運動過多。
17神經遞質水平檢測[5]第14天將所有實驗大鼠迅速斷頭處死，借助腦立體定位儀，取右腦海馬組織及邊緣系統(包括紋狀體、隔核、層殼核、基底節、齒狀回)，精確稱質量，置入1mL處理液(含01mol/L高氯酸和05g/LEDTANa2)中，微量組織勻漿器冰溶下勻漿，4℃冰凍離心10000r/min，取上清液置入-20℃保存。采用高效液相色譜法測定多巴胺(DA)和去甲腎上腺素(NE)濃度。測樣時，室溫下解凍，進樣20μL，以峰面積外標法定量。
18統計學方法采用SPSS130和SAS913版本進行統計學處理和分析，各組神經遞質水平檢測數據分別進行方差齊性和正態分布檢驗，方差不齊采用秩和檢驗，檢驗水平α=005。
2結果
21各組行為學觀察和評分各組治療前后運動行為和刻板運動積分見表1。模型組行為學評分與空白組比較，差異有顯著性意義(P
治療14d后，中、西藥組運動行為積分和刻板運動積分降低，與模型組比較差異有顯著性意義(P
22各組治療前后腦組織DA、NE含量變化比較表2結果顯示：模型組腦組織DA水平降低，NE水平升高，與空白組比較差異均有顯著性意義(P
3討論
IDPN是一種中樞神經毒素，50年代以后就用于神經病理學的研究，本研究參考Wakata[3]的方法復制模型，從神經生物學和行為學兩方面觀察藥物治療對TS模型動物臨床行為學典型特征的影響。IDPN誘發TS模型大鼠出現明顯刻板運動和運動行為異常，如過度興奮、探究行為、異常跑跳、旋轉行為和頭頸部上下側擺等動作均具有TS臨床行為學的典型特征，有時出現連續的嗤鼻、抬舉上肢等動作，類似于人類TS患兒喉部發聲、聳肩等特征行為。本研究通過對藥物治療前后TS模型大鼠運動行為和刻板運動行為評分的比較，發現中藥組在改善動物TS典型特征行為方面效果明顯，如頭部、頸部的抽動減輕，旋轉行為明顯緩解，每次異常行為發作持續時間縮短，異常抽動次數消失，異常跑動及不規律的彈跳運動明顯減少。
雖然目前對TS的神經生物學物質基礎還未完全闡明，但基本認為中樞神經遞質，特別是DA、NE、5-羥色胺(5HT)等與TS之間關系密切[5]，因此，探討大腦多巴胺類神經遞質及其代謝產物的水平是證明藥物神經生物學療效的主要依據。本研究對大腦海馬區DA和NE水平進行測定，結果表明：治療后中藥組DA水平明顯升高，而NE水平有所下降，均趨向于正常水平。與TS有關的神經遞質包括乙酰膽堿、腎上腺素、5HT、多巴胺等，主要分布于紋狀體、隔區、藍斑、黑質等海馬、基底前腦及邊緣系統，構成復雜的神經網絡[6-8]。有關藥物治療對大腦組織不同部位和核團神經遞質水平的影響文獻報道并不一致，而且與檢測時間點有很大關系[8]。本研究結果初步表明，中藥治療14d后，對大腦組織DA和NE兩種神經遞質水平的變化產生顯著影響，對于治療過程中以及停藥后神經遞質的動態變化仍需進一步觀察。
益智寧神口服液的主要組成為：熟地黃、黃芪、白芍、龍骨、遠志、石菖蒲、五味子。其中熟地，其味甘，性微溫，入心、肝、腎經，本品味厚氣薄，為補血生精、滋陰補腎之要藥，《珍珠囊》曰：“主補血氣，滋腎水，益真陰”。黃芪，味甘，性微溫，入脾、肺經，質輕升浮，為升陽補氣之圣藥。可補中氣、益元氣、溫三焦、壯脾陽，選以補脾益氣。白芍味苦、酸，性微寒，入肝經，既能養血斂陰，又能平抑肝陽，還能柔肝止痙;而龍骨味甘、澀，性微寒，入心、肝經，專攻平肝潛陽、鎮靜安神之用，兩者搭配，養陰寧心，平肝潛陽。五味子性溫，五味具備，酸能收斂，苦能清熱，咸能滋腎，溫而不燥，既能益氣生津，補腎養心，用其養心滋腎安神;遠志、石菖蒲有安神益智、化痰開竅之功效。諸藥配伍，具有健脾滋腎、平肝熄風、寧神益智、化痰開竅之功效。氟哌啶醇是目前治療TS的最有效藥物之一[9]，療效確切，但因副作用明顯使其臨床應用受到限制，通過實驗結合臨床用藥發現，益智寧神口服液的療效與氟哌啶醇無明顯差異，且療效更加穩定，易為患兒及家屬接受。
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篇5
摘要：認知習性學作為一種新生之物，是指對非人類動物的思維過程、意識、信念或者理性的進化和比較研究。本文對認知習性學的概念和研究方法進行辨析，并介紹三種針對認知習性學的態度，最后對社會性游戲方面研究內容進行具體介紹。
關鍵詞：認知習性學；研究方法；態度；社會性游戲
心理學研究正在走向新的綜合之路，認知習性學就是這樣一種新生之物，有的說它是認知心理學和習性學的綜合研究。在認知習性學中，人們通過對動物行為的研究，還能加深人類對自己行為和心理的認識。
一、認知習性學的涵義
認知習性學（Cognitive Ethology）被廣泛地定義為對非人類動物的思維過程、意識、信念或者理性的進化和比較研究，該領域的研究依靠各種不同類型的調查和解釋方式進行。這是一個迅速發展的研究領域，吸引了大量的來自各學科的研究者的注意。筆者認為它主要是圍繞“動物行為過程中是否有意識”以及“怎樣研究動物意識”來展開的。
二、認知習性學的研究方法
認知習性學中也像習性學一樣強調自然主義的觀察，因為行為能力是在對自然選擇的壓力做出反應的過程中進化的，所以認知習性學家偏好在盡可能接近自然選擇發生時的自然環境的情境下對動物進行觀察和實驗；因為認知習性學是一門比較科學，所以認知習性學的研究強調廣闊的分類學的比較，且不把關注點放在有限分類中一些選擇的代表上。此外將動物行為的研究定位于進化和比較的框架之中，認知習性學家堅持認為動物的現場研究（包括細致的觀察和實驗研究）可以為動物認知研究提供信息。認知習性學并不一定需要將動物的行為研究帶入實驗室中進行研究，以讓人信服（此處是說明不是只有實驗研究才是科學的，現場研究也是有效地）。
因此，與認知習性學家相對比而言，認知心理學家主要致力于實驗設置的相關主題的研究，并不強調動物認知的進化或比較方面。當認知心理學家的確采用了跨種系比較，他們主要感興趣的是以普遍潛在機制的形式來解釋不同的行為模式；習性學家，和其他生物學家一樣，通常更關注生物體已尋找到的對共同問題的解決方式的多樣性。
三、認知習性學作為一門科學面臨的三種態度
對于認知習性學而言，主要問題是以數據收集的方法、分析、描述、解釋和對動物行為的解釋為中心。因為認知習性學論述動物思維和心理狀態，所以對其研究的可能性有不同的看法，爭論認知習性學是否是一門科學，甚至是否可能是一門科學。這三種不同態度分別為否認論、懷疑論、支持論。筆者認為，三種對認知習性學的態度差異部分是由于所認同的科學研究方法不同造成的。
否認論者否認認知行為學的任何成功的可能性。他們挑選最困難最少接觸的現象進行研究，然后得出結論我們關于這個主題只能得到非常少量的具體信息，并且也不可能在其他方面做的更好。他們否認認知解釋、認知假設。提倡實驗室研究。
懷疑論者很難分類，他們比否定論者稍微開放點，而且他們之間的觀點差異非常大。他們承認認知習性學的部分成功，對未來持一定樂觀態度。很多懷疑論者熱衷于神經學，認為懂得神經系統后會使認知習性學顯得多余（Griffin，1992年，也對神經學很感興趣，但他不擔心神經生物學會導致認知習性學的消失）。他們有時也把困難和可能性混為一談，但是當發現有價值的東西時就會停止懷疑，他們對民俗心理學、神論學、軼事和認知解釋的態度也不是絕對的拒絕。
支持者對于動物認知和認知習性學調查持開放的觀點。他們認為在這方面的研究已經取得了一些成功，認知行為學的研究取向給我們提供了一些新的有趣的數據。他們肯定田野研究以及對比較習性學和進化論的依賴對認知習性學做出的貢獻。支持者們也接受民俗心理學，用它做一些保守的研究。他們還接受運用認知學解釋建立一個系統的解釋性框架，并且認為軼事和擬人化理論有可取之處。雖然支持者們承認Griffin對于實驗研究沒有做出具體詳細建議，但這并不能阻止他們尋求像 Griffin的嚴格經驗法一樣的可行的方法。支持者是批判性的，但他們也是耐心的，他們不想過早的毀滅這一研究領域。Griffin認為我們可以通過認真學習溝通和其他行為模式來探悉動物的想法。
四、認知習性學的研究內容――社會性游戲方面
社會性游戲是認知研究的熱點問題，并且對否定論、懷疑論者和支持者都構成挑戰，游戲比其他研究領域更能提供動物思維的證據。當動物們在游戲時，他們主要運用動作模式，這些模式也用于捕食行為、反捕食行為和求偶行為中。這樣，人們也質疑社會性游戲行為如果不用認知詞匯是不能被研究的。例如，如果你很少被告知Jethro和Henrietta在做一些動作且這些動作描述得很客觀，你不會知道他們正在玩游戲，也不知道他們玩的很高興；因為你不知道那些事情主要由一些也用于其他活動中的動作模式組成。個體需要能夠和潛在的游戲伙伴交流，那些伙伴是它不準備統治的、吃的、與他們的。甚至，他打算與他們玩游戲。對參與社會性游戲的動物的行為觀察顯示，他們希望并且相信只要他們清晰地用某種信號來交流表達他們的游戲意愿，他們對誰會對他們的意圖有反應的想法會被別的個體認識到。在此觀點看來，游戲被看做一項合作事業。
五、結語
總而言之，認知習性學作為一個新研究領域前景還是比較樂觀的，我們應該有耐心待其成長。對于那些否定者的哲學家們，習性學家需要更明確的讓他們知道我們已經知道了什么，我們將做什么，以及怎樣進行研究，盡管哲學家們不能提出方案，但是也可以適當采納他們對實驗設計的現實建議，這同時也能夠讓哲學家們了解認知習性學到底是怎么一回事。此外，現場研究的方法是可取的，要正確看待民俗心理學和神經科學以及其他資料對認知習性學的作用。認知習性學家還需要不斷給這一領域帶來有挑戰性的問題并攻克他們。
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篇6
關鍵詞:運動生理學;運動醫學;慢性應激抑郁模型;行為學;體重;動物實驗
中圖分類號:G804.2文獻標識碼:A文章編號:1006-7116(2010)11-0100-06
Effects of exercising on the ethological expressions and body weight of
chronic stress induced depression model rats
WEI Hong-wen1,JIAO Wei1,ZHANG You-zhi2,ZHAO Nan2,XUE Rui2
(1.Sports Rehabilitation Depatrment,Beijing Sport University,Beijing 100084,China;2.Institute of
Pharmacology and Toxicology,Academy of Military Medical Sciencet,Beijing 100850,China)
Abstract: In order to observe the effects of exercising on the ethological expressions and body weight of chronic stress induced depression model rats, the authors replicated depression model rats by means of chronic unpredictable stress (CUS), used fluoxetine (Flu, a classical antidepressant) as a control, observed the effects of medium intensity treadmill running (MIR) and low intensity treadmill running (LIR) on the ethological expressions and body weight of depression model rats in chocolate milk anhedonia experiment, start experiment and novelty inhibition ingestion experiment, and revealed the following findings: 1) ethological study: CUS could significantly lower the degree of addiction of the rats to chocolate milk, reduce their spontaneous activity, and prolong their ingestion latent period in a novel environment; fluoxetine could significant counteract the said changes; with the continuance of exercising, chronic stress had fluoxetine consistent anti depression like behavior functions; 2) body weight change: CUS significantly inhibited the increase of body weight of the rats, Flu, Flu+MIR and Flu+LIR were all unable to improve the slow increase of body weight of CUS rats; MIR and LIR can improve the condition of slow increase of body weight of CUS rats; their weekly body weight had no significant difference as compared with the rats in the CUS group. The said findings proved the followings: depression model rats showed body symptoms of slow body weight increase and depression like ethological expressions such as anhedonia, spontaneous activity slowdown and ingestion latent period prolongation; exercising has fluoxetine consistent anti depression ethological effects on CUS rats.
Key words: sports psychology;sports medicine;chronic stress induced depression model;ethology;body weight;animal experiment
抑郁癥(depression)屬于情感性精神障礙(mood disorders),是一種以明顯而持久的心境低落為主要特征的綜合征,其高發病率、高復發率和高自殺率對社會造成了極大危害。世界衛生組織(WHO)預計,到2020年,抑郁癥將在全球疾病負擔排名中居第2位[1]。目前治療抑郁癥的藥物普遍起效較慢,有效率也只有60%~70%,且部分難治性抑郁癥更是目前治療的難點[2]。
研究顯示,抑郁癥發生與長期缺乏健身鍛煉有關,不參加運動本身就是導致抑郁癥的重要因素[3]。經常從事體力活動的人患精神疾病的比率明顯低于很少進行體力活動的人[4]。近年來臨床在治療精神類疾病的過程中發現,運動療法用于精神疾病和腦疾病的治療與康復顯現出良好的效果[5],而且運動與抗抑郁病藥物相結合對治療抑郁病比單一藥物療法有效[6-7]。但這些研究仍停留在一般的問卷調查或診療觀察上,缺乏運動抗抑郁作用的機制研究。
慢性不可預知性應激(Chronic Unpredictable Stress,CUS)是近年來國內外應用最為廣泛的抑郁動物模型之一,它可模擬抑郁的核心癥狀――缺乏(anhedonia),目前被廣泛運用于抑郁癥的病理生理機制、抗抑郁藥物研發及作用機制的研究[8]。本研究通過復制CUS大鼠模型,觀察運動對CUS模型大鼠行為學表現和體重的影響,以經典抗抑郁劑氟西汀(Fluoxetine,Flu)作為對照,旨在探討運動的抗抑郁樣的作用。
1材料與方法
1.1實驗動物
65只成年SD雄性大鼠,SPF級,購入時體重150~160 g,購自維通利華實驗動物有限公司,許可證編號:SCXK(京)2007-0001。大鼠每籠4只群養,自由攝食飲水,室溫22~24℃,相對濕度(50±10)%,自然晝夜節律光照。
1.2主要儀器設備
DSPT-202動物跑臺(杭州段氏,中國),VIDEOMEX-V 圖像運動解析系統(Columbus Instruments,美國),大鼠穿梭箱反應儀(Med Associate,美國),噪聲儀(中國)。
1.3實驗設計
1)實驗流程。
大鼠購入后安靜飼養3 d后,進行1周跑臺適應性訓練,接著進行為期4周的慢性不可預知性應激。期間針對不同的組別,分別伴隨給予氟西汀、跑臺訓練干預措施,每周測定體重,并在慢性應激結束后進行開場實驗[9]、巧克力牛奶缺失實驗[10]、新奇抑制攝食實驗[11]。
2)動物篩選及分組。
適應性跑臺訓練負荷安排:坡度=0,跑速=5~10~15 m/min,10~15~20 min/次,1次/d×6 d。訓練期間不使用電擊裝置驅趕大鼠,以避免對大鼠施加不良應激[11]。
將篩選出來的大鼠,根據體重均衡分為7組,每組8只。各組之間體重差異沒有顯著性(P>0.05)。各組具體情況見表1。
3)大鼠慢性應激模型的建立。
參考文獻[9,11,13]方法,并盡量使應激程序符合不可預知性的特點,連續4周每天下午時間給予大鼠采用1~2種如下刺激:禁食24 h、禁水24 h、潮濕飼養(200 mL水加150 g墊料)+孤養24 h、鼠籠45°傾斜24 h、夾尾1 min、電擊(0.8 mA,電擊每分鐘間隔15 s,共30 min)、通宵照明12 h、白噪音(110 dB)1 h、10℃冰水游泳6 min、制動1~2 h。
4)藥物干預。
Flu組、Flu+LIR組、Flu+MIR組每次應激前1 h給予氟西汀(Fluoxetine Hydrochloride,批號000530,白色粉末,純度>99%,由常州第四制藥廠惠贈),灌胃給藥(10 mg/kg),給藥體積2 mL/kg,1次/d。其余組大鼠灌胃給予相應體積的生理鹽水。
5)跑臺訓練。
每天08:30~12:30進行跑臺運動。具體訓練負荷安排見表2。
1.4統計學分析
所有數據以“平均數標準差”( s)表示。統計分析用Windows SAS 6.12軟件完成。SAS引導程序引自文獻[14]。
2結果及分析
2.1跑臺訓練篩選情況
大約至少有10%的大鼠天生不會跑動或者不愿意跑動[12]。所以,在大鼠購入后安靜飼養3 d后進行1周的跑臺適應性訓練,剔除了9只不愿意跑動的大鼠。
2.2巧克力牛奶缺失實驗
由于液體攝入量與體重大小有關,所以各液體攝入量以每kg體重計算。實驗日從2000開始進行測試,測定2 h內大鼠攝入液體的相對質量。結果顯示(表3):各組大鼠液體攝入總量沒有顯著性差異(P>0.05);除CUS組外,其他各組大鼠巧克力牛奶攝入量均顯著多于水攝入量(P
2.3自發活動
將大鼠放入不同于飼養環境的新環境時,首先表現為對新異環境的探究行為,經過l5 s對新異環境的適應和熟悉,然后開始自發活動測試。
采用Videomex-V圖像運動解析系統測定大鼠自發活動,結果顯示(見表4),與Control組相比,CUS組大鼠自發活動減少,表現為測定時間內的活動總路程顯著減少(P
2.4攝食潛伏期
結果顯示(見表4),與Control相比,CUS組大鼠在新奇環境中的攝食潛伏期明顯延長(P
2.5體重
結果顯示(見表5):CUS開始前各組大鼠體重差異無顯著性(P>0.05),符合實驗的基本要求。慢性應激對大鼠體重有明顯影響,CUS組大鼠在2周后體重開始顯著低于Control組(P
3討論
在應激致抑郁的動物模型中,開場實驗、糖水消耗量、體重變化是經典的反映動物抑郁行為學及軀體癥狀的指標[14]。根據文獻,并結合本實驗室的以往研究成果[9,11,13]和實驗條件,本研究選取巧克力牛奶缺乏實驗、開場實驗、新奇抑制攝食實驗這3個行為學測驗,結合大鼠體重的變化,來綜合評價造模的效果。
3.1巧克力牛奶缺乏實驗
CUS抑郁模型腦內獎賞系統一些神經元結構受損,導致快樂體驗能力的缺乏[15]。動物對甜覺獎賞的反應性下降是最簡單、最易于觀察的指標,因此目前國外大多數學者采用液體消耗實驗中糖水消耗量和糖水偏愛百分比來作為測量缺乏的有效客觀指標[8-9,11,13,15],也有研究用巧克力牛奶缺乏實驗(chocolate milk anhedonia test,CMAT)[10]、甜味食物攝取量(sweet food intake)或甜味食物攝取比值(rate of sweet food intake)、美味食物攝取(palatable food intake)、顱內自我刺激(brain stimulation reward)、位置偏愛實驗(place preference conditioning procedure)等實驗來測量[16]。
傳統的糖水消耗實驗由于存在許多繁瑣的步驟[8],如:需要進行糖水基線訓練和測試,大約有10%~15%的動物不能獲得穩定的糖水攝入基線,而且還有同樣比例的應激動物經過3周應激后糖水攝入量并沒有清晰和穩定的減少,這些動物需要淘汰;在實驗時要進行控制飲食等復雜的工作。還有文獻報道,大鼠糖水攝入量(或糖水偏嗜度)在慢性應激后沒有下降,有的抗抑郁藥也不能恢復慢性應激動物下降的糖水攝入量[17]。盡管上述局限性可能與研究者所采用的動物品系、應激程序和糖水實驗方法的不同有關,但從另一方面提示了糖水消耗實驗的方法不夠穩定和敏感,這在很大程度上限制了該實驗在抑郁癥研究領域的應用。
CMAT是另外一種反映動物缺乏的實驗,該方法不需要事先進行液體消耗的訓練,只需要進行一次性測試,具有快速、簡便的特點[10]。
本研究結果表明,在液體攝入總量沒有差異的情況下,CUS大鼠攝入了較多的水,而Control組大鼠攝入了較多的巧克力牛奶,相對于Control組大鼠而言,CUS組大鼠對對巧克力牛奶“沒有興趣”,提示其出現了“缺乏”。大鼠巧克力牛奶飲用量的下降不能單純地解釋為液體飲用的下降(即渴覺的下降),因為動物總液體消耗量并無明顯改變,而巧克力牛奶攝入量、巧克力牛奶偏嗜度顯著下降,提示本研究的CUS模型表現出了動物對幸福事件反應能力的下降。
結果還表明,CUS伴隨給予氟西汀,進行中、小強度運動跑臺訓練,以及氟西汀分別聯合中、小強度運動跑臺訓練,均能夠顯著提升CUS大鼠對巧克力牛奶的“興趣”,“缺乏”顯著減少。表明CUS大鼠出現了抑郁癥的核心癥狀――缺乏,而運動、氟西汀均能夠改善此核心癥狀。
3.2開場實驗
本實驗采用Videomex-V圖像運動解析系統測定動物的自發活動(spontaneous motor activity),該系統能夠自動識別動物的運動軌跡,減少了實驗工作量,更重要的是提高了實驗數據的精度和可靠性。結果顯示,CUS使大鼠自發活動減少,表現為測定時間內的活動總路程顯著減少,與本研究室[8,10,12]以及國外文獻報道一致[17]。CUS伴隨給予氟西汀、進行中等強度跑臺訓練、氟西汀分別聯合中、小強度跑臺訓練均能夠顯著增加CUS大鼠活動距離。表明跑臺運動能夠使CUS大鼠維持一定的自發活動,減少抑郁樣行為。
3.3新奇抑制攝食實驗
新奇抑制攝食實驗(novelty-suppressed feeding,NSF)是動物禁食后在饑餓狀態下新奇的環境中產生攝食和對新環境恐懼的矛盾沖突,長期給予抗抑郁藥物可使動物的沖突反應降低,表現為開始攝食的潛伏期縮短,該模型目前被廣泛應用于抗抑郁劑以及抗焦慮藥物的長期效應評價[11]。
本研究結果表明,與Control相比,CUS組大鼠在新奇環境中的攝食潛伏期明顯延長,慢性應激伴隨給予氟西汀能夠顯著縮短CUS大鼠攝食潛伏期,這與本研究室以往研究結果[9,11]一致。
運動對NSF實驗影響的報道較少。自由轉輪運動顯著縮短了正常小鼠攝食潛伏期,但對LID小鼠(一種以血清IGF-1較低為特點的突變小鼠)攝食潛伏期沒有顯著影響[19]。目前尚未見運動對CUS大鼠NSF影響的文獻。
本研究顯示,CUS伴隨進行中、小強度跑臺訓練,氟西汀分別聯合中、小強度跑臺訓練,均能夠顯著縮短CUS大鼠攝食潛伏期。表明運動,以及抗抑郁藥聯合運動,均能夠縮短抑郁模型大鼠攝食潛伏期,運動在該模型上顯示出較好的抗抑郁樣作用,而且運動進一步加強了氟西汀在新奇抑制攝食模型上的抗抑郁作用。
3.4體重
體重的變化可以看作是抑郁大鼠模型量化的軀體癥狀和體征,抑郁大鼠體重增長緩慢,這與抑郁癥患者的食欲降低、消瘦相類似[8]。
本研究對大鼠每周測定一次體重,結果發現,CUS對大鼠體重有明顯影響,CUS組大鼠在2周后體重開始顯著低于Control組,并且一直延續到慢性應激的第3周和第4周;慢性應激伴隨給予氟西汀,未能改善CUS大鼠體重的增長緩慢,表現為從慢性應激2周后開始到慢性應激結束后,每周體重均顯著低于CUS組;CUS伴隨進行中、小等強度跑臺運動,能夠改善CUS大鼠體重增長緩慢的情況,而且對抗CUS抑制體重增長的情況優于慢性應激伴隨給予氟西汀,表現為LIR組、MIR組與CUS組相比,在整個實驗期體重差異均沒有顯著性,LIR組體重在4周后,MIR組在3周、4周后體重還顯著高于Flu組;CUS伴隨給予氟西汀并分別聯合中、小強度跑臺訓練,也未能明顯改善CUS大鼠體重增長緩慢的情況,表現為從慢性應激2周后開始到慢性應激結束后,每周體重均顯著低于CUS組;Flu+LIR組、Flu+MIR組在慢性應激3周后開始到慢性應激結束,體重均分別顯著低于LIR組、MIR組。
由于本實驗對大鼠進行群養(4只/籠),群養大鼠進食過程中經常有食料遺撒現象,而且慢性應激程序中有禁食、禁水的項目,故無法精確計量每只大鼠的進食量。因此,慢性應激導致大鼠體重增長緩慢,本研究分析可能與HPA軸有關:下丘腦分泌的CHR不但可以刺激垂體釋放ACTH,而且是調節能量平衡和體重的重要因子。慢性應激導致大鼠體重增長緩慢,可能是HPA軸被激活,下丘腦分泌的CHR引起食欲減退,以及在應激條件下能量消耗增加,兩種因素雙重作用的結果[20]。而慢性應激伴隨給予氟西汀進一步降低大鼠體重的原因,與氟西汀的藥理作用有關。氟西汀屬于擇性5-HT再攝取抑制劑,其主要藥理作用在于選擇性地抑制CNS突觸前細胞對5-HT的再攝取,可以通過增加大腦自身的5-HT供給來糾正這種神經遞質的缺乏,從而能夠有效控制抑郁癥的癥狀。動物實驗表明增加突觸間隙5-HT或直接刺激5-HT2C受體可減少進食,反之則增加進食[21]。因此,氟西汀通過升高突觸間隙的5-HT水平,減少了大鼠的進食,進而導致體重下降。
我們也發現與本研究結果類似的報道[11,22],即:抗抑郁藥物能夠有效改善甚至逆轉CUS大鼠抑郁樣行為,但是不能改善其體重的緩慢增長。因此,我們存在這樣的疑惑:盡管抑郁模型大鼠表現出體重增長幅度減少或體重下降已經得到許多研究的驗證,但是當氟西汀能夠有效改善抑郁模型大鼠的行為學異常時,為何不能逆轉其體重下降?是因為本研究的大鼠在總共為期5周(1周適應期,4周慢性應激期)的實驗后(已達10周齡)已錯過了生長發育的最佳時期,慢性應激對其生長發育造成不可逆的抑制,從而使抗抑郁藥物不能恢復其體重增長,還是抗抑郁藥物在發揮抗抑郁作用的同時,也作用于神經內分泌系統的某個靶點,對大鼠體重增長產生抑制作用?這有待于后續工作的深入研究。
本研究結果還說明,慢性應激伴隨進行跑臺訓練,對于大鼠體重增長緩慢有一定的改善作用,對于保持動物的體重有一定的效益。原因可能是適量運動部分平衡了HPA軸的功能,還有可能是運動促進機體新陳代謝,增加了大鼠的食欲,后者引起體重的增長。這有待于今后進一步的驗證。
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篇7
【摘要】 目的觀察和血益智方對 VD 大 鼠行為學和形態學的影響。方法動物隨機分為假手術組和模型組。VD 模型制作成功后隨機分為和血益智方小劑量組和大劑量組、思爾明組、生理鹽水（NS）組。用穿梭箱和水迷宮檢測大鼠行為學并作海馬 HE 常規染色，光鏡觀察。結果和血益智方、思爾明均能縮短VD 大鼠穿梭箱實驗主動逃避時間和遭受電擊時間，減少遭受電擊次數；能縮短 VD 大鼠水迷宮實驗時定位航行潛伏期、游泳的路徑，增加大鼠空間探索實驗中穿越原目標的次數。NS 組海馬細胞體積變大、核變小、有核仁消失和核固縮；除 假手術組正常外，其余各組海馬細胞層次有減少，但細胞排列比較密集、細胞形態尚可。結論 和血益智方可 改善 VD 大鼠的學習記憶能力。
【關鍵詞】 血管性癡呆；MORRIS 水迷宮；學習記憶；海馬
〔Abstract〕 Objective
To study the effects of Hexue Yizhi Formula on learning and memory and the morphology of the hippocampal neurons of the rats with Vascular Dementia (VD).
Methods
The rats were subjected for ischemia-reperfusion repeatedly by blocking the bilateral common carotid arteries to establish VD models. They were pided into four groups randomly after the establishment of VD model. The treating groups were administrated with Hexue Yizhi Formula (1 mL/100 g)、Hexue Yizhi Formula (2 mL/100 g)、 Sermion、Natural Salt Solution (NS) respectively. Animals with the shamed-operation were taken as control. The behavior changes were observed through the Shuttle box test and water maze test at the end of treatment.
Results
In shuttle box test Stimulus Frequency (SC) 、Stimulated Time (ST) and Active avoidance Response Time (ART) of the rats were reduced respectively in Sermion、Hexue Yizhi Formula (1 mL/100 g)、Hexue Yizhi Formula (2 mL/100 g) groups than those in NS group. In the Morris water maze test， Stage of Latency and Pathway were declined and the times were increased markedly acrossing the target. The structure levels of hippocampal neurons reduced， but cells were more normal and intensive in treated groups except NS group.
Conclusion
Our study suggest that Hexue Yizhi Formula can improve the ability of the leaning and memory of the rats with vacular dementia and improve the clinical symptoms of VD.
〔Key Words〕
Vascular dementia; Morris water maze; Learning and memory; Hippocampus
血管性癡呆（vascular dementia， VD）是老年人多發癡呆之一，系繼發于腦血管病變后的緩慢性、漸進性智能障礙。它不僅給患者帶來軀體上的痛苦，也帶來精神上的巨大負擔。湖北中醫學院名老中醫田玉美教授用和血益智方治療 VD 有較好的臨床療效。本實驗從行為學和形態學方面研究了和血益智方抗大鼠 VD 的作用，現報道如下。
1
材料和方法
1.1
動物及分組
經穿梭箱實驗篩選的健康正常 SD 大鼠，體重220~250 g，雄性，隨機分為假手術組（10 只）和模型組。將造模成功的 VD 大鼠 40 只隨機分為 HXYZ 組 1（和血益智方小劑量）、HXYZ 組 2（和血益智方大劑量）、思爾明（Sermion）組、生理鹽水（NS）組，每組各 10 只。所用大鼠均由湖北省實驗動物中心提供〔SPF 級，動物合格證號 SCXK（鄂）2003-0003〕。各組大鼠均常規飼養。
1.2
試劑及器材
Sermion（普強蘇州制藥有限公司，批號為0302005）、染發劑（貂油黑發霜，廣東順德市現代保健用品有限公司）。
和血益智方含當歸、川芎、白芍、生地、黃芪、旱蓮草、女貞子、益智仁等，生藥材均購自武漢市武昌區中藥材公司劉有余堂藥店，經我院詹亞華教授鑒定為正品。所有藥材一次性水煎濃縮為125% 水煎液，用無菌玻璃瓶分裝、密封，經 Co60 照射后 4℃ 保存。給藥前在 40℃ 恒溫水溫箱中加熱備用。
Morris 水迷宮、穿梭箱實驗系統（中國醫學科學院北京藥物所）、DR-HW-2 電熱恒溫水溫箱（北京醫療設備廠）。切片機（Leica）、顯微鏡（Olympus）、顯微攝像系統。
1.3
方法
1.3.1
模型制作及給藥
VD 模型制作及術后處理按參考文獻[1]進行，夾閉大鼠雙側的頸總動脈 5 min、后復灌 1 h、連續 3次、末次灌注后永久性結扎雙側頸總動脈造 VD 模型。假手術組僅分離雙側頸總動脈，既不夾閉也不結扎雙側的頸總動脈，其他與模型組相同。
動物造模成功后，適應性飼養 3 d 后開始給藥：HXYZ 組 1、假手術組大鼠給予 125% 和血益智方水煎劑，Sermion 組給予 0.5 mg/100 g 思爾明混懸液、NS 組給予生理鹽水，以上各組均按 1 mL/100 g 灌胃； HXYZ 組 2 用 125% 和血益智方 2 mL/100 g 灌胃；各組動物均用藥 30 d。
1.3.2
行為學檢測
從用藥第 26 天起，分別進行大鼠穿梭箱實驗和Morris 水迷宮實驗。
1.3.2.1
穿梭箱實驗
大鼠穿梭箱實驗每日 1 次，連續 5 d，共 5 次；每次穿梭箱實驗于當天晚 6 時進行，方法參考文獻[1]。
1.3.2.2
水迷宮實驗
Morris 水迷宮實驗每天 2 次，連續 5 d，內容包括學習訓練、定位航行（游泳時間設定為 120 s）、空間探索實驗（游泳時間設定為 30 s），具體操作方法同參考文獻[1]。Morris 水迷宮實驗于每天白天進行。每次大鼠穿梭箱實驗和Morris 水迷宮實驗各組別順序相同。
1.3.3
病理學觀察
行為學檢測完畢，立即斷頭處死大鼠，取左側海馬甲醛固定，然后作 HE 常規染色，光鏡觀察。
1.4
統計方法
各組穿梭箱實驗電擊次數、電擊時間、主動回避時間和水迷宮實驗潛伏期、穿越目標次數、路徑等指標用 SPSS 10.0 軟件進行 AVON（單因素方差分析）檢驗。根據方差齊與否，再選擇相應的統計分析方法。
2
結
果
2.1
行為學實驗結果
2.1.1
穿梭箱實驗
和血益智方能明顯縮短 VD 大鼠主動逃避時間和遭受電擊時間，減少遭受電擊次數（表 1），與 NS 組比較有顯著性差異（P < 0.05）。但作用不如Sermion 組。
2.1.2
水迷宮實驗
經過和血益智方治療 30 d 后，藥物組比 NS 組動物定位航行潛伏期縮短，游泳的路徑也縮短（表2）；在空間探索實驗中，30 s 內大鼠穿越原目標的次數增加（表 3）。上述指標經統計分析均有顯著性差異。它們的游泳軌跡如圖 1~5。
2.2
病理學檢測結果
光鏡下觀察：假手術組海馬 CA1 區、CA2 區、CA3 區、CA4 區以及齒狀回等各區的分子層、錐體細胞層（顆粒細胞層）、多形細胞層之細胞排列緊密有序，顆粒細胞大小一致，核圓而大，邊界及核仁可見，神經纖維排列整齊；NS 組海馬 CA1 區細胞大小不規則，錐體細胞層層次減少，排列稀疏，細胞體積變大，有數量不等的小空泡，細胞核變小，結構不清，核仁消失，核固縮為三角形或多角形，神經纖維排列紊亂，神經元脫失現象明顯。
其它各組海馬顆粒細胞層次有減少，但層數較模型組多，細胞排列比較密集、整齊有序，細胞缺失存在，核圓而大，邊界及核仁尚清楚，胞漿內成分減少，神經纖維排列不太整齊。組織病理切片提示模型組神經元有損傷，用藥物治療后神經元損傷有所減輕。海馬組織（HE 染色，400 倍）的病理切片如圖 6~10。
3
討
論
VD 是繼發腦血管病變的中樞神經元結構和功能損害，導致患者認知、學習、記憶、理解等能力下降。不同類型的記憶有不同的神經結構和回路參與，這些神經結構的血流減少或中斷，就會引起功能障礙，如不及時恢復血流，神經細胞就會腫脹、死亡[2]。因此，現代醫學對 VD 的治療[3]包括：①治療原發腦血管病；②改善腦功能。所用的藥物如思爾明為二氫麥角堿類藥，有α受體阻斷作用，能擴張顱內腦血管，改善腦血流，有比較明顯的抗 VD 效果[4-6]。
VD 的證候與中醫的“呆病”、“文癡”、“健忘”、“善忘”等相當，田玉美教授從臨床實踐觀察認為 VD 以氣血虧虛、肝腎不足者居多，兼有痰瘀互病者亦不少見，治宜調和氣血、滋補肝腎。方中當歸辛溫，血虛能補、血瘀能散，使氣血調和、各有所歸；川芎辛溫，活血解郁、行血中之氣；白芍微溫，和營滋陰，與當歸、地黃同用為滋陰養血之良藥；生地甘寒養陰，與歸芍同用有補血生血之功；黃芪炙之則溫，大補元氣，填空補虛（髓），為補氣藥之長，與四物湯同用，起益氣養血之用；旱蓮草、女貞子甘寒補血，滋肝腎之陰；益智仁補腎益智；法夏則辛燥，降氣化濁，對本方中補氣養血藥起補而不滯，潤而不膩的作用，故和血益智方能調和氣血、滋補肝腎，填精生髓。
中藥藥理學研究表明川芎有擴張腦血管、改善微循環、抑制血小板聚集的作用；黃芪、當歸有促進骨髓造血、擴張血管的作用，當歸還有穩定細胞膜作用；生地能增加“陰虛”動物模型腦內 M-膽堿受體的結合位點，并且可促進“血虛”動物紅細胞、血色素的恢復，有顯著的“生血”作用；白芍有抗血小板聚集作用。黃芪對雙側頸動脈結扎所致的動物腦缺氧有顯著對抗作用，可增加小鼠的學習記憶能力。和血益智方抗 VD 的確切機制與生物活性成分有待進一步研究。
（* 吳正治：博士研究生導師）
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篇8
【摘要】目的 探討β淀粉樣蛋白、BACE1在小鼠D-半乳糖中毒模型中的變化。方法 我們首先用D-半乳糖制做模擬Aβ代謝異常的阿爾茨海默病小鼠模型，并于用藥后90天后取分腦。取腦前用五天的水迷宮實驗在行為學上分析小鼠的記憶和學習能力。對所取分腦用Western雜交確定Aβ和BACE1蛋白的改變。結果：D-半乳糖處理的小鼠在水迷宮行為學測試中逃避潛伏期明顯延長；Aβ和BACE1的蛋白水平明顯升高。結論：D-半乳糖可誘導的小鼠腦中β淀粉樣蛋白、BACE1的表達增加。
【關鍵詞】D-半乳糖；β淀粉樣蛋白；β分泌酶
The expression of β-Amyloid and BACE1 were upregulated in the mouse brain treated by D-galactose
Sun Na, Liu Shiliang, Qi Shengxia
(Jiao nan Wangtai Township Health Centers, Shan Dong, Qing Dao 266425)
Objective: The aim of this study was to investigate the expression of Aβ and BACE1 in the brain of mouse treated by D-galactose. Methods:Twenty four Kunming strain mice were separated into two equal groups randomly. One group was administered D-galactose for 90d, the control group with equivalent 0.9% NaCl. Five days Morris water maze test was used to evaluate mice learning and memory at 90 days after administered D-gal or saline. BACE1 and Aβ protein level of brain was measured by western blot. Results: D-galactose treated mice exhibited significantly impaired learning in the Morris water maze. Western blot indicated that there was a tendency of increased Aβ and BACE1 expression. Conclusion: The expression of β-Amyloid and BACE1 were upregulated in the mouse brain treated by D-galactose.
Key Words:D-galactose; β-amyloid; BACE1
阿爾茨海默病（Alzheimer’s Disease ，AD)是世界范圍內發病率最高的神經變性疾病。老年人中60－70％的進行性認知功能障礙最終可確診為阿爾茨海默病。阿爾茨海默病的發病機制不明，其最主要的病理變化是老年斑（senile plaques）。老年斑主要是由β-淀粉樣蛋白（β amyloid, Aβ）組成的，而β淀粉樣蛋白是一種由β分泌酶(BACE1)水解淀粉樣前體蛋白(APP)產生的約4 kD 的小肽。我國學者最早提出腹腔注射D-半乳糖制作AD模型[1]。D-半乳糖誘導的鼠腦阿爾茨海默病樣改變的原因不明，本文分析評估了D－半乳糖誘導的阿爾茨海默病小鼠模型中Aβ及BACE1的表達情況，試圖對D-半乳糖誘導的這兩種蛋白的變化做初步評估。
1. 實驗材料與方法
1.1. 小鼠癡呆模型的建立
昆明種小鼠，雌雄各半，共二十四只，體重20±2g, 由南京市江寧試驗動物中心提供，標準鼠飼料常規喂養。二十四只小鼠先按雌雄隨機分組，然后隨機選取一組雌鼠及雄鼠作為加藥處理組，另一組作為對照組，加藥組頸背部皮下注射D-半乳糖（90mg/kg）每天1次。對照組頸背部皮下注射等量生理鹽水。在用藥90天時間點對兩組小鼠行水迷宮試驗評估智能狀態。
1.2. 水迷宮實驗
Morris 水迷宮：圓形水池直徑為120cm, 高60cm, 平臺高度50cm, 直徑10cm, 平臺低于水面1cm, 水溫25±1℃, 水的表面覆蓋白色塑料泡沫顆粒。實驗期間迷宮外參照物保持不變。實驗前1天，讓小鼠熟悉水迷宮環境。實驗歷時5天，每天訓練1次，分別從東、南、西、北4個點入水，入水時，小鼠面向池壁，記錄小鼠找到平臺所需時間即逃避潛伏期。
1.3. Western blotting
選取海馬用蛋白裂解液提取總蛋白質，用Brad―ford方法測寵蛋白質濃度。蛋白采用8-10％SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳送行分離，然后轉至PVDF膜上，室溫下搖動封閉2h(TBS-T加5％脫脂奶粉)，加入抗BACE1 (Mab5308，Chemicon， 1：1000) 或Aβ單抗(4G8，44-356， Biosource，1：1000)；鼠源 anti-GAPDH antibody (SANTA CRUZ, Europe，1：1000)包被抗體；PBST洗膜后加入1ml 1：2000 IgG-HRP抗體；PBST洗膜； ECL plus Western Blotting Detection System 試劑盒檢測蛋白表達水平。以bandscan圖像處理系統對膠片翔描測定感光區帶的感光密度，根據曝光條帶判斷蛋白的表達結果。
1.4. 統計學處理
所有數據均用平均±標準差表示，行為學測試及所有相關分子檢測數據均采用雙尾獨立t檢驗，統計顯著性設置為P
2. 實驗結果
2.1. D-半乳糖處理后小鼠行為學的變化
用D-半乳糖(D-gal)處理的模型組小鼠90天時平均逃避潛伏期(19.1±4.78s)明顯比生理鹽水(Saline)對照組(14.87±3.64s)長(n=12; p
2.2. Aβ和BACE1蛋白表達的變化
我們用Western blotting的方法檢測了Aβ和BACE1在海馬中的含量。在D-半乳糖處理組中，給藥組Aβ的蛋白含量顯著高于對照組；給藥組BACE1的蛋白含量顯著高于對照組，表1。
3. 討論
自從Alois Alzheimer在1907年報道了首例老年癡呆癥患者的腦部變化到1984年George Glenner分離出β淀粉樣蛋白后的20年間，“β淀粉樣蛋白”假說得到了越來越多的證據支持[2]。其基本觀點為：Aβ的沉積是AD發病的始發因素， Aβ在大腦內的清除速率小于其產生速率而導致其在大腦內的沉積是AD相關病理的主要發病機制。該假說有著眾多的遺傳學，分子學，生物化學和神經病理學的發現作基礎。但阿爾茨海默病的原發性病理生理變化尚不清楚。動物長期注射D-半乳糖后，后者血清濃度將維持在一個較高的水平，其代謝產物半乳糖醇不能被代謝而在細胞內堆積，影響滲透壓，導致細胞腫脹，代謝紊亂。D-半乳糖還引起腦神經元的一系列退行性改變，如神經元數目減少、腦組織中超氧化物歧化酶活性下降、丙二醛和脂褐素水平升高[1]。本實驗中我們重點考察了D-半乳糖誘導的鼠腦中Aβ和Aβ代謝途徑中的關鍵酶BACE1的表達情況。
在我們的實驗中小鼠海馬A和BACE1在給藥90天后顯著升高。BACE1是A合成的限速酶。有研究提示在BACE1表達缺陷的轉基因鼠中A相關病理改變缺失[3]。BACE1水平在AD患者及AD動物模型中均有提高[4]。我們的研究顯示BACE1水平在給藥組有明顯升高。這就提示D-半乳糖可能通過誘導BACE1的表達進而促進鼠腦中β淀粉樣蛋白的蓄積，從而引起小鼠腦組織的一系列退行性改變，最終導致智能的減退。實驗結果還提示如果能找到一種檢測患者腦組織中BACE1水平的方法就可以對AD進行早期診斷，對阿爾茨海默病的診斷和治療將具有重要作用。
參考文獻
[1] Shang YZ，Gong MY，Zhou XX，Li sr，Wang BY．Improving efects of SSF on memory deficits and pathological changes of neural and immunological system in senescent mice．Acta Pharmacol Sin (2001) 22(12)：1078―108
[2] Tanzi,R.E. and Bertram,L., Twenty years of the Alzheimer's disease amyloid hypothesis: A genetic perspective, Cell, 120 (2005) 545-555.
[3] Ohno, M., Cole, S.L., Yasvoina, M., Zhao, J., Citron, M., Berry, R., Disterhoft,J.F., Vassar, R.,2007.BACE1 gene deletion prevents neuron loss and memory deficits in 5XFAD APP/PS1 transgenic mice. Neurobiol.Dis. 26,134145.
篇9
關鍵詞: 癲癇；ERK ； NF-κB； 托吡酯
中圖分類號：R917 文獻標識碼：A 文章編號：1004-7484（2012）06-0100-03
作為神經系統的常見疾病之一，癲癇在我國的發病率已超過7‰,目前研究表明，癲癇的發生于離子通道、神經膠質細胞及神經遞質都有密切關系[1]。現有的藥物已能在很大程度上控制癲癇的急性發作，但是癲癇反復發作后會造成一定程度腦損傷，導致神經元凋亡以及功能失調，尚不能完全解決[2]。托吡酯(TPM)是由氨基磺酸酯取代單糖的新型抗癲癇藥物，能通過切斷鈉通道，提高GABA激活受體的頻率。有研究表明，TPM還具有保護神經元作用，其機制尚未明確[3]。本實驗通過復制急性癲癇大鼠模型，并通過觀察癲癇大鼠行為學，探討TPM的干預作用，最后通過免疫印跡法，觀察ERK蛋白的磷酸化及下游NF-κB 蛋白表達的變化，進一步探討TPM對神經元的保護作用的可能機制，為其臨床應用提供實驗依據。
1 材料與方法
1.1 實驗分組給藥及癲癇模型的制備
健康清潔級成年wistar大鼠實驗36只，雌雄不限，體重(200 ±30)g,實驗分組見表1
組別 n 給藥方式
對照組 5 腹腔注射5ml生理鹽水
氯化鋰―匹羅卡品組
(處理組) 6 腹腔注射氯化鋰3 mmol/kg, 24小時后注射30 mg/kg匹魯卡品
TPM低劑量組 7 腹腔注射TPM20 mg/kg，
1h后腹腔注射氯化鋰3 mmol/kg, 24小時后注射30 mg/kg匹魯卡品
TPM中劑量組 7 腹腔注射TPM40 mg/kg
1h后腹腔注射氯化鋰3 mmol/kg, 24小時后注射30 mg/kg匹魯卡品
TPM高劑量組 7 腹腔注射TPM80 mg/kg
1h后腹腔注射氯化鋰3 mmol/kg, 24小時后注射30 mg/kg匹魯卡品
1.2行為學觀察
腹腔內注射后連續觀察大鼠行為, 并記錄癲癇發作的潛伏期、 發作程度和持續時間, 參考 Racine 分級標準[4]。
1.3 取材及白提取及蛋白樣本制備
發作后0.5h，將中劑量TPM干預組中4只及處理組中3只大鼠予戊巴比妥鈉 (80 mg/kg)深麻醉, 迅速斷頭、咬開顱骨、剝出雙側海馬；發作后2.5h，照以上方法處死剩余動物并取材。
組織白提取試劑盒購于上海碧云天生物技術有限公司，將組織勻漿后按試劑盒要求提取白。
1.4western blot檢測ERK磷酸化水平和NF-κB 蛋白活化
用12%聚丙烯酰胺凝膠電泳，濕法轉膜，含5%脫脂奶粉的PBS封閉液封閉1h后加入一抗，4oc孵育過夜，洗膜后加入熒光素標記的二抗37oc孵育1h。采用GAPDH作為內參，用LI-COR Odyssey進行熒光顯色并計算條帶灰度值。實驗均重復至少3次。
1.5 統計學處理
運用SPSS 10.0軟件，進行單因素方差分析，顯著性水平P
2 結果
TPM對氯化鋰― 匹羅卡品誘導的大鼠行為學的影響
生理鹽水組無癲癇發作；匹魯卡品注射后15~18min后出現癲癇III ~I V級發作，6只大鼠出現強直陣攣，3~4h后發作停止；不同劑量TPM干預組的發作程度明顯減輕，只在低劑量組有一只I V級發作。采用SPSS進行Ridit分析，匹魯卡品組R=0.000，TPM低劑量組R=0.3180(P
2.2.1 western blot檢測p-ERK水平和NF-κB 蛋白活化的變化
0.5h時間點樣品中，與空白對照組相比，各組ERK磷酸化和NF-κB 蛋白活化水平均明顯增高，有極顯著差異（P
與0.5h時間點樣品相比，2.5h時間點磷酸化水平和活化水平下降，有顯著差異（P
圖 1 圖2
圖3
3討論
托吡酯 (TPM)( 2. 3∶4. 5-雙氧-1-甲基亞乙基-- D-硫酸果糖)是從果糖的D型鏡像體中提取出的一種新型的抗癲癇藥。在對體外培養的神經細胞元進行電生理和生化研究中發現托吡酯的抗癲癇作用與阻斷神經元異常放電，調節抑制性神經遞質與興奮性神經遞質活性都有關系。
促有分裂原活化蛋白激酶 (Mitogen- activatedprotein kinases ,MAPKs) 家族 ,是將細胞表面信號轉導至細胞核的重要傳遞者。目前已知的MAPK通路主要有三組：ERK1/2(細胞外信號調節激酶)MAPK家族，P38MAPK家族，JUK/SAPKMAPK家族。已知后兩類通路的激活參與細胞凋亡過程及炎性反應。ERK信號通路主要參與細胞生長增殖與分化，而ERK通路的持續激活可以阻止細胞凋亡的發生[4]。
Kawasaki[2]在1997年的研究中也已發現，在急性癲癇發作的大鼠模型小腦顆粒細胞中MAPK家族的三個成員均被激活，而 P38MAPK和JUN的激活是一過性的，而ERK的活性水平在3h后仍未回到基本水平。
本實驗中，處理組的結果與Kawasaki報道中的大致相同，ERK通路在急性發作0.5h后已被激活，2.5h后仍未回到基準水平。由于ERKs通路的主要功能對細胞增殖、分化與維持存活至關重要。可以推想ERKs的持續磷酸化可能是細胞遭受損害后的一種內在保護機制。
而TPM干預組中，急性發作2.5h后的ERKs磷酸化水平中高劑量組與處理組相比有明顯升高，與低劑量組亦有顯著性差異，中劑量組與高劑量組間無顯著性差異；中劑量組中，急性發作2.5h后與0.5h時相比，ERK磷酸化水平雖有下降，但與2.5h時處理組相比，仍有顯著升高。這說明TPM干預后ERK通路被持續激活，參與保護癲癇反復發作中易損的腦神經元。
核轉錄因子( nuclear factor-κB, NF-κB)是一種廣泛存在于哺乳動物細胞中的轉錄因子，是將胞漿內的信號傳導至核內的重要媒介。由于NF-κB在細胞死亡時活化增強，故多年來認為NF-κB是導致細胞死亡的因素[2]。然而目前認為這種觀點有欠缺，NF-κB活化增強是由于系統受損后細胞保護信號通路被激活，從而起到防止細胞死亡的作用。研究表明，MAPKs可通過磷酸化NF-κB發揮其調控功能[3]。
本實驗中，急性癲癇發作后，處理組與生理鹽水對照組相比，細胞核內活化的NF-кB明顯增高；而2.5h后與0.5h相比水平下降，這可能與ERK通路磷酸化水平下降相關，說明ERK通路與NF-кB之間有相互影響的作用。TPM干預組中，中劑量和高劑量干預組與低劑量及處理組相比，NF-кB一直保持較高活化水平，可能與ERK通路激活水平較高有關，這證實了TMP的保護作用；而中劑量組中，2.5h與0.5h相比，NF-кB活化水平下降應該與JNK通路的失活的影響有關。
綜上所述，ERK通路在大鼠癲癇急性發作的海馬體中能被激活，自發保護神經元細胞阻止凋亡，NF-кB參與此過程；而托吡酯能將激活的持續時間延長，激活的后續水平提高，這可能是TPM保護作用的重要機制。
參考文獻
[1] 臧穎卓,范亞林,李虹等.癲癇發病機制的研究現狀[J].腦與神經疾病雜志,2009,17(1):78～80,封3.
篇10
關鍵詞：文化；人類學；危機；生命文化學
眾所周知，人類學家宣稱，人類學是關于人類歷史的科學。美國的人類學研究傳統分為四支（特別是在Boasians的研究推動之后）：生物人類學、考古人類學、語言人類學和文化人類學[1]。Robert Borofski（2002）的研究揭示出來，在文化人類學的子分支之間的聯系已經非常薄弱[2]。人類學的分支越來越專一化。過度的專業化是人類學面臨的一個問題。
人類學面臨的第二個問題是“文化”這個詞本身。20世紀初，人類學家把人類學界定為關于文化的科學，而現在人類學家逐漸變為文化研究方面的專家[3]。人類學家把文化界定為他們用來研究世界上不同人類群體的生活方式的理論、認識論和方法論的工具。大量關于文化的概念起源于20世紀的上半個世紀[4]。盡管文化的概念眾多并且沒有確立一個統一的標準，但是人類學家普遍承認這樣的假設：文化是后天習得的，基于符號的歷史產物。換句話說，文化與自然相對，擁有自己存在和進化的方式。
而到了20世紀下半葉，文化達到了一種濫用的程度，尤其是被“種族中心論”的人誤用。Adam Kuper陳述了它的成功：“現在每個人都進入到文化中來。”[5]換句話說，我們正在見證這個世界的文化膨脹。
Keesing在1974年預測了未來的研究熱點：“‘雅諾馬米文化’、‘日語文化’、‘文化的發展’、‘自然與文化’：我們的人類學家仍然使用這個詞，我們仍然認為這意味著什么。但是從靈長類動物存在的學習傳統，使用工具和操縱符號，我們再也不那么肯定文化符號的習得性遺傳是人類所獨有的了。”
僅僅一年后，Edward Wilson出版了《社會生物學：新的綜合》。他定義社會生物學為“所有社會行為生物學基礎的系統研究。[6]”同時，他宣稱社會生物學的目的是“利用當代綜合進化論的成果重新規劃社會科學。[7]”
自從70年代以來，所謂的進化派社會科學一直在學術界中發展和傳播。我用“進化的社會科學”這一標簽來稱謂用進化論的方法來研究人類文化的那一派研究。這個標簽反映了在科學和社會科學研究前沿的交叉，現在有很多學者使用這個詞。在進化的社會科學領域最先進的無疑是社會生物學、進化心理學、人類行為生態學，人類行為學，模因論、以及“基因――文化”共同進化的的方法。上述學科的代表發展了他們自己關于文化的概念，我們稱之為文化進化論。
那么，早期文化人類學家把文化定義為一種后天習得的基于符號的歷史產物，而社會生物學家的定義則是完全對立的，他們認為文化是一種生物學上的適應性，或者說文化是符合“自私的基因”的利益的。進化心理學和人類行為學中也有關于文化的類似表達。
人類行為生態學和“基因――文化”共同進化理論，都在文化人類學對立的角度使用文化的概念，但是在研究方法上兩者有所不同。他們認為文化不是生物適應的產物，基因并不能操縱文化。
在行為生態學中文化是在某種特定的生態環境下生物最大化自己繁殖度的適應性策略。他們在人類行為的水平上研究文化；他們認為文化是一種對于當地生態環境和社會文化環境的適應型策略（SmithWinterhalder1992）.那么，文化是一種行為的適應性。
共同進化方法包括基因和文化之間的相互動力系統。例如，William Durham已經列出了基因與文化作用的五種關系（1991）：cultural mediation（文化調節），genetic mediation（基因調節），enhancement（增強），neutrality（中立）and opposition（反對）.前三種是互動的，后兩種是比較的（Durham 1991，205207）。總之，他認為兩者在互動中可能會影響到對方。基因與文化的關系將參照：（1）相同的目標（增強）；（2）矛盾的目標（反對）；（3）不同，但目標并不矛盾（中立）。文化不能解釋為基因進化的產物。在協同進化理論中，文化是基因與社會文化環境協同進化的產物。
在前面的論述中，我概述了目前的被看作是整體科學的人類學中的危機。首先是，人類學的過度強調分支化和跨人類學的薄弱的合作性。其次，危機的根源是，文化概念在人類學中的滑坡，它被指責將西方的工具加在非西方的社會中的一種中心主義的建構。第三個根源是，“文化”這個概念的膨脹，人類學成功地給出“模因”，并認為它承載了一個更為寬泛的意義，它最終將涵括任何東西。并且如果是在這種意義上，文化實際上是一個空洞的詞匯。危機的最后一個根源是，在進化社會科學中對文化這個概念的寬泛的討論。它的表征是從人類學意義上來使用這個概念，但是一般來說，這并不是一個合適的背景。
基于文化學理論框架的生命文化學，方便了人們對進化社會科學和人類學的理解，生命文化學是一個文化學的分支。生命文化學這個概念是由美國人類學家伊諾?若斯在1980年提出的，它是一個物理人類的分支的標簽，主要是從文化人類學的觀點，來關注文化和生物現象。生命文化進化從文化屬于非生物學的適應性這個前提出發，將人類與其它生物區分開來，但是它并不意味著，人類獨立于他過去的進化。
相反，文化有它進化的根源，人類是被他的特征所決定的，并且建立在人類基因的生物進化過程中。另外，生命文化學處理一種更為寬泛的主題包括動物和人類的不同。生命文化學進一步研究的是生物和文化適應性及進化之間的關系，分析社會生活的主要因素，并關注后天PK先天討論的結論。生命文化學可以從文化人類學的傳統這一方面和從進化社會學另一方面，為了支持人類作為生命文化個體的整合性研究。簡單來講，生命文化學采用了從科學和社會科學中認識的相關的發現并從文化角度來進行解釋。
生命文化學對于目前的人類學在三個方面的難題起作用。首先，生命文化學支持科學和社會科學的交叉性學科的合作性研究。其次，它將文化看作是在科學對人的研究中理論上、認識論上和方法論上的工具。最后，它方便了對人類學和進化論方法在文化的研究上，對人類本質的二分的難題的克服。
[參考文獻]
[1]Kuper，Adam（2000）：Culture：Anthropologists’Account.Cambridge：Harvard University Press.
[2]Kuper，Adam（2000）：Culture：Anthropologists’Account.Cambridge：Harvard University Press.
[3]Borofski，Robert（2002）：The Four Subfields：Anthropologists as Mythmakers.American Anthropologist，104（2），s.463480.
