保險學習心得范文
時間:2023-03-21 05:29:40
導語:如何才能寫好一篇保險學習心得,這就需要搜集整理更多的資料和文獻,歡迎閱讀由公文云整理的十篇范文,供你借鑒。

篇1
到黃州學習了三天,雖說天氣炎熱,感覺有點累,但是很值得,比任何一次的學習收獲都要多,真的是受益匪淺。不但學到了很多專業知識,還有優秀的同仁們展業經驗的精彩分享,最重要的是談教授的講課深深的打動了我,吸引了我。
很多人都說做保險是靠關系,很難,不好做,要求人,沒面子,其實最重要的是自己的觀念,任何行業只要做的成功就有面子,保險是一種具有責任與愛心的事業。它富有挑戰性,能使人充滿激情,重塑自信自強的個性,在協助他人做出決定,幫助他人在實現生命和健康保障的同時實現財富保障的遞增,同時也給自己帶來收入,幫助了他人,快樂了自己,使自己有了成就感,實現人生輝煌,體現自己的人生價值。何樂而不為呢?
還有自己的內在形象也很重要,要想做好保險,除了學好專業知識,還要先學做人,先獻愛心,先交朋友,先做服務,后做保險。所以我們壽險營銷員一定要記住的圣經:交天下朋友,結天下善緣;知天下人心,保天下太平; 造天下大福,積天下大善;播天下仁愛,濟天下蒼生。
最后就是;堅持 !相信!你相信什么,你就做什么;你相信多少,你就成功多少;你相信多久,你就成功多久;你永遠相信, 你就永遠成功。
篇2
1故障現象
血線燈點亮成紅色,故障報警燈亮起,聲音報警急促,血泵停止。
2故障代碼
C COFB 088 042; C COFB 088 043; C COFB 088 044; C COFB 088 045; C COFB 088 046; C COFB 088 047; C COFB 088 048; C COFB 088 049。其中以C COFB 088 048最為常見。
3原理分析
血線探測器的原理是對紅外線進行探測,也就是通過計算接收到紅外線強度的大小來判斷血路中是否有漏血,實際電路中就是有一個紅外發光二極管提供紅外線,通過兩段透明的管道,讓光線穿過其間夾著的血路,然后到達紅外接收管,檢測到的光信號會轉換成電信號,通過后續的轉換電路會送到電腦芯片參與計算,與電腦中存儲的數據進行比較,然后做出相應判斷。
4故障排除
4.1硬件處理:用酒精棉簽或蘸清水擦拭血線探測器表面,去除可能附著的鹽水或血液留下的臟污,開機,如果不再報警,則進入調校程序進行校準;如果還報警,則需要關閉機器,打開機器上面的蓋子,拔下探測電路的插頭,把探測電路拆下來,對發射管和接收管進行清潔,對光路傳輸的兩段透明管路的表面進行清潔,然后裝好機器,開機,進入調校程序校準,大多數故障經過這樣處理就會得到解決,然后機器正常運轉。極少數情況下,這樣處理后還不能排除故障,那么存在的原因則是:①電路板本身存在臟污,則用無水酒精去除;②發光管能量不足或損壞,則更換發光二極管;③接收管故障,更換接收管;④其他可能存在的故障,則只有聯系服務商了。
4.2程序校準:在顯示窗口處于暗的狀態時,同時按壓操作面板上方中間兩個沒有標識的鍵(暗鍵)和左下角的確定(箭頭)鍵,3~5秒后,顯示窗亮起,通過調節SET旋鈕選至Service/Preset,按“確定”進入,在40秒內輸入機器維修代碼(58,96,44或16,90,00),選擇Service后按“確定”進入,再選擇Calib進入,選擇Transd,然后選Extern進入,通過旋轉SET旋鈕找到PRIMING DETECTOR,按確定鍵,把提前準備好的干凈透明的透析管路插入探測器后,按確定鍵,等待2~3分鐘,機器會自行檢測并計算數據,存儲入EEPROM,然后提示按“HOLD”鍵退出,再按“HOLD”三次,退至SELECT SERVICR MODE選EXIT后進入MAINTENANCE SELECTION,選Fch按確定鍵進入機器自檢。至此,完成程序校準。
篇3
通過一段時間的“保持***員的先進性教育”學習活動,學習十六大通過的中國***新及中央保持***員的先進性教育活動辦公室編寫的《保持***員的先進性教育讀本》等理論書籍,對縣委提出的黨員先進性學習討論題進行了深刻思考,認識到要想始終保持***員的先進性,就必須時時刻刻加強對黨員的學習教育,加強對黨員的制約。具體來講,我認為保持黨員先進性必須做好以下四個方面:
1、正確認識“三個代表”重要思想。一個真正的***員,要想具有先進性,保持先進性,就必須在政治、思想、道德、文化等方面用****道德要求自己,使自己在現實生活中成為高尚道德的行為主體。首先,在個人要求方面,黨員既要模范執行黨的現行政策,又要發揮高尚道德風格。黨的現行政策是黨依據當前的任務和現實客觀條件制定出來的,其目的是調動絕大多數人積極性,促進社會生產力發展,其著眼點是對整個社會行為的規范。***員作為社會中的一員,理所當然應該模范執行黨的現行政策,這本身就有道德示范的意義。在執行黨的現行政策的前提下,當出現同樣的機會誰先占,應得的利益誰多得、社會的弱者誰照顧、必要的犧牲誰承擔等政策規范不到的問題時,***員就要發揚高尚道德風格,先人后己,必要時放棄自己的利益,無私奉獻,甚至犧牲自己的生命。就像在驚心動魄的關鍵時刻,***員要發對黨和人民高度負責的精神,指揮在第一線、沖刺在第一線、奮戰在第一線、奉獻在第一線;必須發揮中流砥柱的作用,處變不驚,力挽狂瀾,以解倒懸之急;必須擺正國家、集體、個人三者之間的關系,在進退去留的考驗中顯示自己的大氣魄,在是非善惡的考驗中顯示自己的大智慧,在榮辱得失的考驗中顯示自己的大氣量。這樣的黨員不正是體現了先進道德文化的示范性?其次,在道德教育方面,黨員既要講黨性,又要講良心,不能把自己的道德等同一般群眾的道德。道德是有其內在支配機制的,以是非感、正義感、責任感、同情感和自尊、自愛、自重等為表現的道德良心,對道德選擇的確定,道德目標的追求和理想人格的形成有重要影響作用。黨員以最純潔的良心支配自己的道德行為,在群眾中樹立起既高大,又親近的道德榜樣。
2、正確處理個人利益和公共利益的關系,增強黨員全心全意為人民服務的觀念。***同志指出:“我們黨來自于人民,植根于人民,服務于人民,建設有中國特色社會主義的全部工作的出發點和落腳點,就是全心全意為人民謀利益。”要保持黨員的先進性,就必須在如何全心全意為人民謀利益上下功夫。為此,黨員就必須在工作和生活的各個方面嚴格要求自己。我認為,關鍵的就是要樹立以下四個觀念:第一,當官不為發財的觀念。***是執政黨,領導是人民的公仆。因此,當官不是發財的崗位,想發財,就不要做官;想做官,就不要想發財。第二,為民不遺余力的觀念。以人民群眾的呼聲為第一信號,以人民群眾的需要為第一選擇,以人民群眾的利益為第一追求,以人民群眾的滿意為第一標準。第三,辦事不圖回報的觀念。為人民群眾辦事是黨員干部的天職,個人不應該指望得到什么獎勵,什么報償。只要合乎條件,人民群眾要做什么,我們就給予什么方便,沒有什么價錢好講的,也沒有什么理由好推辭的,更沒有什么物質好索取的。“辦事圖什么?”辦事只圖功效,只圖人民順心,人民滿意。資本主義國家的公務員尚能如此,***的黨員又怎能落后。第四,工作不帶私心的觀念。無數事實證明,有了私心就沒法全心全意為人民謀利益,就會變成只說不做,虛偽的人。有了私心,就不能頭腦清醒,就不能秉公辦事,就不能理直氣壯,就不能得到人民群眾的信賴。
3、努力提高黨員的業務素質。衡量和判斷一個黨員先進還是落后,其先進程度如何,最根本的是看黨員在推動社會生產力發展中的作用。對先進生產力的發展有多大的貢獻,是否順應社會發展的一般規律,始終站在歷史發展的最前列,在代表最廣大人民群眾的根本利益的同時,是否使自身成為社會的先進部分。“誰是***員要讓人民在眾一眼就能看出來。”黨員要使自身成為社會生產力的先進部分,就必須不斷地學習,不斷提高自身的業務素質。
4、著力強化黨員管理機制。完善規章制度,沒有規矩不成方圓,為始終保持黨員的先進性,還必須建立一套保持黨員先進性的處理、約束、管理機制。這樣做是有充分理由的,既然規定黨員必須有先進性,既然我國的權力屬于人民,我認為,黨員有沒有保持先進性,就應當讓人民群眾來評定,對于那些自始就沒有先進性或者沒有保持先進性的黨員、黨員干部就可以說“不”,而且說了“不”就應該起作用。否則,再好的道德教育,再高的科學文化素質,都無法保證黨員的先進性。***曾經指出制度問題“更帶有根本性、全局性、穩定性和長期性”。有了完善的制度,可以避免黨員少犯錯誤或不犯錯誤錯誤,更好體現先進性。那么,我們在推進行政工作中,堅決做到在公開、公平、公正的發展環境中按程序實施行政執法責任制,切實保護公民、法人和其它社會組織的合法權益, 努力做到全心全意為人民大眾服務。
篇4
人們常說,教師是人類靈魂的工程師,是燃燒自己照亮別人的蠟燭。當楊大山老師走上講座席的時候,我驚奇地發現他是一位殘疾人。
可是他依然一瘸一拐地走上臺中間給我們講述他的經歷,看到這一幕,我的心深深地震撼了,作為一個身體健全的年輕教師來說,有什么理由不去做好教師這個工作呢?結合學習有感而發,談談自己的一些體會:
楊大山老師的事跡為我做出了學習的榜樣,我在思考,如何更好地將這種精神融入到我日常工作中?為此他也為我們年輕的教師提出了“十多十少”的建議:多接觸學生,少高高在;多循序善誘,少嚴詞呵斥;多提前預防,少亡羊補牢;多埋頭苦干,少閑言埋怨;多接受意見,少一意孤行;多自己成為,少上交學校。多表揚鼓勵,少溺愛袒護;多賞識發揚,少惡語打擊;多慈母心懷,少嚴父尊容。多平等對待,少偏護偏愛。從楊老師的簡短的總結中,我深刻地體會到了“教育的真諦就是愛,愛是教育的出發點和歸宿”這句話的深刻意味。告訴我要以赤誠的愛心、事業心、責任心和一顆平常心,在自己的崗位上兢兢業業、勤勤懇懇、扎扎實實地工作,正如他所說的那句話“既來之,則安之”、“干一行,愛一行;愛一行,鉆一行”。還要求我們平等對待每一個學生,不歧視差生,用心去和學生交流,用愛去和學生碰撞。
呂正強老師是一位年輕的教師,只有三十出頭,如今也已是模范教師的代表了,聽了他的事跡后,敬佩之情更是油然而生。他說當他剛師范學校走出來的時候,參加了教師招聘考試,接著被分配到了農村,更讓他沒有想到的是一干就是十幾年。期間他也感受了教師的無奈與艱辛,自己的思想也被動搖過,但有一種信念確讓他堅持走了下去,就是“愛學校、愛學生、愛教育”。就是因為這種深深的愛讓他成就了今天的事業。
篇5
關鍵詞:大學生;創業;信息環境;現狀
一、信息環境的意義
信息環境是一個意義十分寬泛的概念,它是指與人類信息活動有關的一切自然、人類、社會和心理因素的總和。創業信息環境即是指大學生自主創業的外部信息環境,包括圍繞在大學生周圍的創業相關信息,及其大學生獲取信息的渠道和相關場域。
大學生的任何創業活動都需要在一定的社會環境之下進行,而創業活動本身作為一項復雜的社會活動,對于缺乏實際操作經驗和社會歷練的大學生而言,信息的數量和質量要求尤為重要。信息環境在某種程度上已成為衡量創業環境的重要指標,優化創業環境,在一定程度上就是優化大學生自主創業的信息環境。完善大學生自主創業的信息環境建設,對于推動更多的大學生走上自主創業之路,具有強大的推動和支持作用。
二、信息環境的現狀
(一)政府信息化改革滯后對信息環境的制約
1、角色定位的偏差
政府的角色定位至今沒有完全實現服務導向的轉變。由于角色定位上的偏差,政府仍然在被動的向社會提供信息,被動的與信息受眾進行交流互動,大大增加了有志于創業的大學生主動了解政府有關創業相關信息的難度。與此同時,由于缺乏信息交流互動平臺,政府在制定相關政策時沒有相應的信息收集和論證過程,政策的出臺就有可能脫離大學生創業的實際需求。
2、信息孤島的制約
由于歷史的原因,政府在信息化的過程中存在著較為普遍的“信息孤島”問題,與大學生創業相關的工商、稅務、社保、衛生等相關部門的信息得不到整合,政務信息資源處于一種半開放狀態,大量的有效資源沒有得到充分的利用。大學生在缺乏一個有效獲得完整信息機制的情況下,自發收集的信息難免造成缺漏、錯誤等情況,從而影響大學生自主創業的順利實施。
3、簡單信息化的障礙
目前,一些地方政府的信息化建設還僅僅處在一個通過互聯網門戶網站簡單信息的階段,缺少必要的信息反饋機制和互動平臺,相關的咨詢功能也較為匱乏。同時,現行的行政審批、稅收等等與大學生創業息息相關的制度卻沒有根本性的改變,尤其是在對大學生創業貸款項目的扶持和審核上,沒有相應的制度和規范,缺乏固定的運作程序和明確要求。不少懷著創業夢想的大學生,面對層層人為的障礙,只能望而卻步。
(二)高校創業教育模式對信息環境建設的忽視
1、信息環境對大學生創業心態、創業能力的作用得不到發揮
課題組的調查結果顯示,保定市部分高校大學生的創業想法,來源于高校的不足20%,更多的大學生,受到的是來自媒體和生活環境中創業人物和事跡的影響。同時,他們對創業的理解亦過于狹隘,多是將創業單單定義為創辦企業等高目標,或者對創業資金決定論有著盲目的崇拜,認為資金是決定創業成功與否的唯一要素。部分大學生則認為創業只是一些具有技術專長的,或者是經管專業學生的出路。這些想法和觀念上的誤區,與他們學習和生活的環境,尤其是信息環境是密切相關的。
缺乏正確的信息導向,從單一、零散的信息環境所獲取的不完整信息,直接導致了大學生創業認知誤區的形成。高校的創業教育忽視了信息環境的建設,既沒有形成一個有利于創業的輿論氛圍,也沒有建立一個集創業相關信息為一體的信息系統。創業的輿論氛圍,應該包括什么是創業,創業要求哪些精神和品質,創業需要哪些條件和支持等等,而創業的信息系統,應是整合了高校硬件資源與教師資源的綜合信息平臺,為學生提供必要的技術支持和知識支持的配套服務體系。由于高校的創業教育在引導形成正確的創業認知方面缺少有力的調試手段,以至于在大學生創業思維的形成階段,許多有志于自主創業的大學生陷入了認識上的泥沼,從而難以取得創業實踐方面的較大突破。
2、信息檢索和處理能力是創業教育中的薄弱環節
即使有了良好的信息環境和信息服務體系,面對浩瀚的信息海洋,如何從中甄別篩選出符合自己需要的信息,是對大學生信息搜集能力的一大挑戰。近些年來,不斷有不法分子利用大學生淺薄的社會經驗和焦急的就業心態,一些所謂的加盟創業等信息,行騙屢屢得手,一方面是政府對信息監管力度的不夠所致,另一方面,大學生缺少必要的信息檢索、甄別和篩選的能力。現行的高校創業教育,多集中于創業流程方面,反而忽視了對大學生創業基本素質和心理品質的磨練和培養,舍本逐末,使得大學生真正走上創業之路時步履維艱。
具備良好創業素質的大學生,應該掌握較高的信息檢索和處理能力,不但能夠從紛繁復雜的信息中篩選出符合需求的信息,同時能夠初步鑒別信息的真偽,將大量相似的信息提煉加工,并根據自己創業目標和創業規劃加以重組整合。隨著社會信息化進程的加快,信息的重要性日益凸顯,信息已經滲透到社會生活各個領域,成為人類社會不可缺少的重要資源。人們的一切行為決策,都要建立在相關信息獲取分析的基礎上。可以說,掌握了信息,就掌握了創業的時機和發展方向。
(三)信息環境中的社會資本因素
布爾迪厄(Pierre Bourdieu)于1980年首次提出了“社會資本”這個概念,經過20年不斷的研究和爭論,其內涵大致上得到了統一,即指嵌入個人社會關系網絡中但不為個人所直接占有,而通過個人的直接的或間接的社會關系而獲取的各種有用資源。對于具有創業熱情的大學生而言,專業知識、技能的優勢僅僅是找到成功創業的一方面因素,學生自身的“關系網絡”、家庭的經濟和社會地位及社會關系等也異常重要,且是常被學生所用的因素。而這些,對于個體來說,就是他們自主創業所必須的社會資本。信息環境,則是將這些有用社會資本綜合在一起的紐帶。
中國仍然是一個傳統的人情社會,與西方歷經數百年的制度社會有著本質上的區別,人與人之間的關系常常凌駕于規則和制度之上,這對于大學生創業有著不可替代的影響。僅就大學生創業的資金獲取渠道而言,課題組的調查情況表明,由于我國政策性貸款和商業性 貸款制度的制約,大學生的創業啟動資金絕大多數來源于他們的社會資本——家庭、親朋好友的借款。非制度性的資金保障,恰恰是大學生自主創業遲遲不能全面發展的重要因素。雖然一部分人可以獲得創業基金的支持,但是由于我國的創業投資仍處于起步階段,各種信息咨詢服務機構良莠不齊,投資資金不充足,創業融資相當困難。而且在創業投資基金與大學生創業項目之間還存在著嚴重的信息不對稱,種種因素,使得許多優秀的創業計劃難以付諸實踐。
此外,有上海、浙江、江蘇等經濟發達地區的調查表明,最終成功創業的大學生,大多是家庭環境較為優越,具有豐富的社會關系和融資渠道,以及父母親朋具有豐富的創業經驗的群體。[1][2][3][4]他們的生活環境充滿了創業氛圍,對機遇有著獨特的洞察力和判斷力,具備對創業風險的專業化評估,等等。他們的社會資本,為他們營造了一個得天獨厚的創業溫室。因此,社會資本對我國大學生自主創業的影響,不應該被忽視。
三、信息環境——充分發揮大學生自主創業社會效益的助推器
河北省地處大渤海經濟區的中心地帶,環抱兩大直轄市,而保定地處河北省中部核心區域,良好的區位優勢,為大學生自主創業提供了多彩的舞臺和豐富的資源。完善信息環境建設,才能創造更好的創業氛圍,鼓勵創業行為,發展經濟,促進創業帶動就業,緩解大學生就業壓力。
而從保定市企業角度來看,整合信息資源,開發信息環境,有利于更多的創業者和初創企業管理人員吸收創業資源,盡可能多地爭取外部環境的支持,保證創業活動的順利進行。
對于高校的創業教育而言,只有不斷提高信息環境質量,才能為高等院校提升創業教育的針對性與適用性,培養具有創新意識與創業能力的人才,提供豐富的實際范例與社會資源。
信息環境的改善,還能大大提升大學生的就業信心和就業能力。通過對創業信息環境的分析,使大學生對創業客觀實際情況有更加清晰的認識,在學習中更具針對性更為合理而科學地確定自己的奮斗目標,增強自己分析問題與解決問題的能力,提高自身市場競爭力,為適應未來工作打下堅實的基礎。
參考文獻:
[1]杰弗里·蒂蒙斯,小斯蒂芬·斯皮內利.《創業學》,人民郵電出版社,2005年9月.
[2]馬林斯.《創業測試》,中國人民大學出版社,2004年4月.
[3]應金萍.大學生創業取向及其對環境與政策的訴求社會科學戰線2009(10).
篇6
11月16日,在瑞金三中匯報廳我有幸聽了瑞金市教育系統2018年“四愛”好園丁宣講報告會的十位成員先進事跡演講后,我受益匪淺,讓我深深懂得:教師是知識的化身,是智慧的靈泉,是道德的典范,是人格的楷模,是學生們人生可靠的引路人。換而言之,教師是學生美好心靈的塑造者。因此,我要時刻以"德高為師,身正為范"這八個字提醒自己。無私奉獻、以德立教、以身示教,用高尚的人格為每顆純潔心靈的塑造而竭盡全力。
一、樹立事業心,增強責任感熱愛教育事業。
教書是手段,育人是目的。因此,我們教師在任何時候都不能忘記,自己不單單是為教書而教書的“教書匠”,而應是一個教育家,是人類靈魂的工程師。
“以情育人,熱愛學生;以言導行,誨人不倦;以才育人,親切關心;以身示范,尊重信任”。尊師愛生,是一種理性化的高尚情感,對待學生,管而不死,嚴而不厲,愛在其中。教育是愛的共鳴,是心和心的呼應。教師只有熱愛學生,才能教育好學生,才能使教育發揮最大限度的作用。可以說,熱愛學生是教師職業道德的根本。對學生冷漠,缺乏熱情,決不是一個有良好師德的好教師。教師愛學生體現在“嚴”和“慈”上。常言道:“嚴師出高徒。”又說:“嚴是愛,寬是害”。對學生不嚴格要求,嚴格訓練,是難以培育出跨世紀的可靠接班人和合格的建設者。“自古雄才多磨難,從來紈绔少偉男”。所以,對學生不嚴不行。當然,嚴要得法,嚴要有度。慈,就是對學生要關心、愛護、寬容、尊重。充分鼓勵學生的自尊和自信,關心學生的學習和成長進步,使學生全面發展。教師要與學生平等相處,尊重學生、信任學生、愛護學生、保護學生。教師對學生的愛,即是敬業精神的核心,又是教師高尚品德的自我表現,既是育人的目的,又是教師教書這個職業的具體表現。
二、用無限的師愛,開啟每個學生的心靈。
高爾基說過:“誰不愛孩子,孩子就不愛他,只有愛孩子的人,才能教育孩子。”師愛是教師必須具備的美德,也是教師的天職。無限的師愛,可以開啟每個學生的心靈。因此,在教育工作中,我把信任和期待的目光灑向每個學生,傾聽學生的意見和呼聲,和學生產生思想和情感上的共鳴,讓一切學生的心靈都感受到師愛的溫暖。
三、用規范的言行,凈化每個學生的心靈。
“無德無以為師。”真正優秀的教師。一定是以身作則、率先垂范的人。他對祖國的愛,對學生的愛,對事業和未來的愛,都表現在他對自己的高標準要求的落實上。率先垂范就是對學生真正的負責,就是潛夠默化、影響深遠的教育。作為小學教師的我們,肩負著培養教育下一代,為祖國的未來夯實基礎的重任。這就要求我們本身要有一定的人格魅力,而這種人格魅力表現為教師必須要有敬業精神,必須具備健康的價值觀和高尚的道德情操。
四、用奉獻的人格,塑造每個學生的心靈。
篇7
關鍵詞 信息技術;珠寶類專業教學;互聯網
中圖分類號:G642.4 文獻標識碼:B
文章編號:1671-489X(2016)04-0148-02
Application of Teaching Mode Supported by Information Tech-nology of Jewelry in Modern Education//XING Yingying
Abstract Combined with jewelry major, through the Internet + education example, discusses the application of information technology teaching mode to the modern education.
Key words information technology; jewelry education; internet
根據喬伊斯和韋爾給出的定義,所謂教學模式是指“一種可以用來設置課程、設計教學材料、指導課堂或其他場合教學的計劃或范型”。由于傳統教學模式一系列的缺點,大量新型的教學模式被提出,如交互式教學模式、層次教學模式等,這些顛覆傳統的教學模式為傳統教學注入新的血液。尤其隨著近幾年的發展,信息技術支持下的互聯網、多媒體等迅速融入教學過程,為實施教學模式創新、實現新型教學目標創造了必不可少的條件。
隨著信息技術的快速發展,移動互聯網技術悄然改變了傳統教育模式。移動互聯網教育自2012年移動互聯網大會后逐漸興起,正影響著傳統課堂教學。《國家中長期教育改革和發展規劃綱要(2010―2020年)》中指出:“強化信息技術的應用,更新教學觀念,改進教學方法,提高教學效果。”2012年3月教育部頒發的《教育信息化十年發展規劃(2011―2020年)》中著重強調信息技術要與高等教育教學模式深度融合,創新人才培養模式[1]。本文基于當前移動互聯網時代環境,結合華南理工大學廣州學院珠寶類專業教學,探討移動互聯網在教育教學中的應用。
1 行業現狀
改革開放以來,以廣州為代表的南部中心珠寶加工制造業已占我國的70%~80%,其中進出口額上升到全國的72%,特別是翡翠銷售占全國銷售量的80%以上,已成為全國最大的珠寶玉石(翡翠)集散地和銷售中心。產業的高速發展促進了珠寶教育的辦學規模逐漸壯大,目前開設珠寶研究生、本專科及職業教育的院校高達20多所。經過一段時間的辦學實踐,珠寶教育的主體由過去的主要為重點院校向一般院校逐漸轉移,這些學校各自形成其獨特的辦學風格,職業學院主要培養應用型人才,而重點本科院校則承擔了研究型人才的培養任務。
但是無論珠寶類教育的培養目標如何各有側重,信息化在其中的使用還是甚少,特別是各大院校聯合建設信息化教學平臺更是無人提及。信息化技術的欠缺無疑制約了珠寶類教育的發展速度,也是目前教育界亟待重視和解決的問題。
綜觀高等院校中的其他專業,信息化教學模式建設為改變以課堂講授為主的傳統教學模式創造了條件,使教學環境、資源、形式、方法、評價等形成互聯網化、多媒體化的多元新變革,引導學生面對多元化的新變革應學會如何思考,不盲學,如何為突破已知而學,如何培養創新素質的教育新理念,轉變了我國教育長期以來教師如何教、學生就如何學,教學如何考評、教師就如何教的教學模式。
2 信息化技術教學模式的現狀
目前,很多高校在互聯網+思想的影響下,實施一系列新型的教學模式。與傳統教學中教師一直講、學生被動聽的“填鴨式”教學相比,基于網絡的開放式教學模式充分利用現代網絡技術,與先進的教學方法相結合,逐步啟動了教學內容新穎化、教學形式多樣化和考評方式立體化的新局面。移動互聯網教育是一種“O2O模式(Online to Offline)”,最大特點是可以跨越時空,能克服師生互動交流障礙。因此,基于移動互聯網的教學可實現線下傳統課堂講授新知,線上學生間交流、師生互動,線下問題線上答疑,形成線上教學有效地彌補傳線下傳統課堂教學的教與學的閉環模式[1]。
雖然基于信息化技術的新形式教學極大改善了僅依托于課堂封閉式教學的若干缺陷,但其自身仍存在需要改進之處[2]。首先,目前的網絡教學模式無法提供連續性教學的軟硬件。目前高職院校采購的軟件和硬件都有一定的局限性,使用1~2年可能就用不了了,原因主要是很多教學內容無法進行連續性更新,內容很分散,前后斷開,學生學習的時候找內容很困難。由于網絡環境的不同,教師和學生在訪問和使用的時候遇到很多問題,比如在學校以外無法訪問校內服務器。同時,各個專業搭建自己的網絡平臺,造成資源的極大浪費。另外,互聯網教學模式無法提供隨時隨地的教學,還有教學資源的浪費、傳統教學模式的融合,這些都是信息技術應用的瓶頸。
3 信息化技術的教學模式在珠寶類專業中的應用
目前,珠寶類專業引入信息化技術的教學模式還較少,在信息技術如此迅猛發展的時代,教學中如何加快信息技術的利用和信息化人才的培養都是當前面臨的問題。對于教師,教學資料大量信息化,教材、課件、教案、教學要求、教學參考資料等上傳院校構建的FTP網站,甚至構建了學生自主學習的網站和訓練題庫。總而言之,教學利用多媒體構建了教學內容的結構化、動態化、形象化。對于學生,由于信息技術的應用,幾乎顛覆了傳統教育中學生對書、筆、紙的依賴,網絡和多媒體技術為他們構建了更加豐富的學習環境,提供了學習資源、學習工具全球化的共享資源,包括教育網站、電子雜志、虛擬圖書館、各種期刊網、數據庫等。這些都需要珠寶類專業教師去學習并與專業教育相結合。
目前,華南理工大學廣州學院率先與深圳市百變美金珠寶有限公司自主研發的“月光寶盒?微飾界”進行合作,使“月光寶盒?微飾界”與學校產品設計(珠寶首飾設計與加工)專業中的課程相結合,使學生有個一展才華的平臺。通過合作,學生的創作能夠變成實物并通過該平臺展示在大眾面前,使其在設計之初就較好地與市場相結合。這種方式較為靈活,以學生自主學習為主,學生通過這種“互聯網+教育”的模式開拓了思路,促進了學習主動性,使教學效果得到極大的提升。
4 “互聯網+教育”的應用模式
基于移動互聯網教育的小、靈、快的特性,可借鑒John M. Keller教授提出的ARCS動機學習模式,即從注意(Attention)、關聯(Relevance)、自信(Confidence)和滿意(Satisfaction)四方面激發學生的學習動機。
激發學習動機的首要條件是吸引注意力,那么如何吸引學生注意力是教、學的關鍵。教師要充分結合“90后”大學生的特點,利用學生對新鮮事物的好奇心理,1)通過新奇的教學情境吸引學生;2)通過變化的教學元素,如變換的教學多媒體方式,保持學習興趣;3)通過提出問題、引導思考問題、最終解決問題,激發學生的學習探究力。
關聯性是指在教學中要以學生為主體,把教學內容與學生的學科基礎背景、生活學習環境和個性需求聯系起來。首先,教學初期通過案例向學生介紹教學內容、學習目的價值,引導學生制定學習目標;其次,教學中采用通俗易懂、與學生基礎相關的術語、案例和語言習慣等,把學生的知識整體關聯起來;最后,通過合適的教學策略,把學生的個性化需求匹配起來,如學生可以根據自己的空余時間、地方、興趣完成課后論題。
樹立自信心是激發學習動機的關鍵條件,教師應積極通過各種方式培養學生的學習信心。教師可以通過給予學生明確的學習要求和評價準則,制定多元的學習成果和及時反饋等提高學生的學習積極性。研究表明,移動互聯網上的學習者之間會主動地溝通交流,能以良好的表現獲得同行的肯定,并會產生強烈的優越感。對于一些不善于面對面交流、比較內向的學生來說,因移動互聯網教育的時空獨立性進行的不同形式的學習而取得良好的學習成績。
讓學生感受到學習的快樂和價值,體驗到學習的滿足感是持續學習的內在動力。首先,教師創設真實或模擬性的情境,讓學生運用學到的知識,旨在學生體驗到學以致用的滿足感,激發學習動力;其次,對學生的習得成果給予充分的表揚和激勵,維持學習動力;最后,按照統一的標準評價全體學生,不管是課堂上的學習還是移動互聯網上的習得,都讓學生感受到教師的公平公正性。
筆者認為,移動互聯網環境下的學習具有動機的自發性、內容的碎片化、時空的跨越性和目標的自適應,教師應設計有效的移動互聯網化的課堂教學,充分考慮自主學習的形式和學生個性,積極引導,探索協助學習、知識共享、個人探究的新型學習方式[1]。
信息技術的發展帶來新的教學模式,是高新技術與教育教學深度融合的新契機,是3G/4G移動通信技術、Internet技術和新媒體技術在現代教學上的有機結合和運用。教師在移動互聯網平臺上提供學習資源,學生不受時空限制地通過智能移動設備在平臺上獲取資源,并建立師生有效互動。當然,移動互聯網下的教學不論在技術上還是教學理念上都還有待探索,普及運用更需時間。但隨著云計算、大數據、移動互聯網技術的發展,移動互聯網作為傳統課堂教學的有益補充、智慧校園建設的重要組成,在高校必將有很大的應用潛力。
參考文獻
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[3]游碧蓉.互聯網教學與傳統教學的優勢整合[J].企業與教育,2015(2):56-57.
篇8
1、牢固樹立“安全第一”思想通過這次幾起事故案例的觀看和學習,應加大安全宣傳教育力度,執行嚴格的安全考核制度,使職工牢固樹立“安全第一”思想,提高安全意識,把安全工作放在重中之重,使安全工作在整個日常工作中置于首位。
2、完善和落實各項安全管理制度。通過這次事故案例的學習,應建立健全符合本所實際的、切實可行的安全管理制度,嚴格執行煤氣系統多年以來行之有效的規程、制度,大力開展安全分析會、安全日活動、班前班后會、安全檢查活動等安全生產例行工作,規范生產作業場所安全管理,切實把安全措施和安全工作落實到位,提高生產車間整體安全管理水平。
3、加強安全教育培訓,提高職工安全意識和技能通過這次幾起事故案例的學習,在安全生產中,事故發生的直接原因往往是人的不安全行為,人為失誤占較大的比例,因此,加強安全生產教育培訓,提高員工安全意識和安全素質,是防止產生不安全行為,減少人為失誤造成事故的重要途徑。要提高我所安全水平,就必須加強安全教育和培訓,通過各種安全知識的培訓、考試和考核,職業道德和安全責任心教育,安全活動日學習等方法,幫助職工正確認識和掌握安全生產規律,提高職工的安全素質,使職工熟悉必要的安全技術知識,熟練掌握本崗位所需的安全操作技能,把安全生產的理念融入職工的思想,變“要我安全”為“我要安全,我會安全”,將安全潛移默化為自覺行動和良好習慣,使職工形成良好的安全意識,自覺貫徹執行黨和國家的安全生產方針、政策和法律法規,遵守企業有關安全的規章制度,杜絕違章指揮、違章作業和違反勞動紀律的行為,從根本上保證生產安全。
4、完善并落實安全生產責任制和安全考核制度通過這次事故案例的學習,如:沒有嚴格的考核;安全工作制度落實機制薄弱,安全監督、安全保證和安全激勵機制不到位,以制度約束人、激勵人的良好機制沒有很好地形成等。安全生產,人人有責,要提高我所安全生產水平就必須在落實安全生產責任制上下功夫,建立健全安全生產工作機制,制定全面、完善、合理的安全生產責任制,并運用相應的考核制度來保證責任制的嚴格執行,使每個專責、每個員工都能明確知道本職責、本崗位應負的安全責任并且認真地履行。
篇9
[關鍵詞] 前列康片;頭孢呋辛酯片;慢性前列腺炎;血清細胞因子
[中圖分類號] R697.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2017)14-0028-04
[Abstract] Objective To investigate the influence and therapeutic effect of Qianliekang tablets combined with cefuroxime axetil tablets on serum cytokines in patients with chronic prostatitis. Methods 148 patients with chronic prostatitis who were admitted to our hospital from January 2013 to December 2015 were selected and randomly divided into two groups. The patients(n=74) in the observation group were treated with Qianliekang tablets combined with cefuroxime axetil tablets and 74 patients in the control group were treated with cefuroxime axetil tablets.The influence and therapeutic effect of Qianliekang tablets combined with cefuroxime axetil tablets on serum cytokines in patients with chronic prostatitis were explored by comparing the clinical symptoms improvement, Chinese medicine symptoms and the changes of secretory immunoglobulin A (SIgA),vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) and serum VCAM-1 between the two groups. Results The clinical total effective rate was 94.59% in the observation group, higher than 78.38% of the control group. The difference was statistically significant(P
[Key words] Qianliekang tablets; Cefuroxime axetil tablets; Chronic prostatitis; Serum cytokines
慢性前列腺炎是泌尿生殖疾病的一種,約有一半男性會在某個時期受其困擾,嚴重影響男性健康[1-2]。慢性前列腺炎可分為慢性細菌性前列腺炎和慢性非細菌性前列腺炎,細菌性前列腺炎的病因主要為葡萄球菌屬感染,臨床多表現為反復發作的尿路感染[3-4]。非細菌性前列腺炎致病因較為復雜,由多種原因共同導致,臨床多表現為骨盆附近疼痛。慢性前列腺炎治療時間長,久治不愈可能會導致患者生活質量下降,影響患者身體及心理健康。針對性治療慢性前列腺炎,不少藥物取得了一定的成效,包括頭孢呋辛酯片、前列舒通及寧泌泰膠囊等。有學者研究發現[5-6],中醫藥治療慢性前列腺炎有較好療效,其中采用前列康片治療慢性前列腺炎更是擁有獨特優勢。本研究以我院2013年1月~2015年12月接診的148例慢性前列腺炎患者作為研究對象,通過比較兩組患者臨床癥狀改善、中醫癥候及前列腺液中SIgA、VCAM-1及血清VCAM-1變化,討論前列康片聯合頭孢呋辛酯片對慢性前列腺炎患者血清細胞因子的影響及療效,現報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇我院2013年1月~2015年12月接診的148例慢性前列腺炎患者,隨機分成兩組各74例,觀察組患者給予前列康片聯合頭孢呋辛酯片治療,對照組患者給予頭孢呋辛酯片治療。其中,觀察組74例,年齡為22~50歲,平均(32.4±7.1)歲;體重52~89 kg,平均(64.7±11.4)kg;病程3~48個月,平均(23.6±10.4)個月。對照組74例,年齡為21~49歲,平均(34.1±8.4)歲;體重53~87 kg,平均(66.2±11.8)kg;病程3~47個月,平均(23.8±10.3)個月。本實驗經醫院倫理委員會審批通過,患者知情同意并簽署知情同意書,納入排除標準參照國際泌尿外科前列腺炎癥診斷標準[7],所有患者診斷均符合慢性前列腺炎,兩組患者的年齡、體重和病程等一般資料無統計學意義(P>0.05),具有可比性。
1.2 方法
對照組:給予頭孢呋辛酯片治療,頭孢呋辛酯片規格型號0.25 g×6 s,生產企業Glaxo Operations UK Limited(英國),批準文號H20130343,口服1次1片,一日2次。連續服用1個月。觀察組:在對照組的治療基礎上加服前列康片,前列康片規格0.5 g×60片,浙江康恩貝制藥股份有限公司,國藥準字Z33020303,口服一次4片,每日3次。兩組均治療30 d為一個療程。
1.3 觀察指標
觀察患者治療前后疼痛或不適、排尿異常及生活質量改變,監測前列腺液中SIgA、VCAM-1及血清VCAM-1變化,記錄中醫證候治療前后積分及療效。
1.4 評定標準
①臨床療效評定[8]:臨床控制:連續兩次檢查正常及癥狀積分減少90%以上;顯效:白細胞計數減少及癥狀積分較治療前減少60%以上;有效:白細胞計數減少及癥狀積分較治療前減少30%以上;無效:白細胞計數減少及癥狀積分較治療前減少30%以下或都沒減少。②NIH-CPSI指數:是美國國立衛生研究院慢性前列腺炎癥狀指數[9],根據評分表評分,用于患者治療前后比較。③中醫證候療效評定:治愈為中醫證候積分減少≥90%,顯效為中醫證候積分減少≥60%且
1.5 統計學分析
選用軟件SPSS 19.0進行數據統計[11],數據運用(x±s)來表示,計量資料比較采用t檢驗,計數資料運用[n(%)]表示、采用χ2檢驗,等級資料比較運用Wilcoxon兩樣本比較法,P
2 結果
2.1 兩組患者臨床療效比較
觀察組臨床療效總有效率94.59%,高于對照組臨床療效總有效率78.38%,兩組比較差異有統計學意義(P
2.2 兩組患者治療前后NIH-CPSI指數比較
兩組治療前NIH-CPSI指數沒有明顯差異,兩組治療后NIH-CPSI指稻有顯著改善,觀察組的改善更優于對照組,兩組比較差異有統計學意義(P
2.3 兩組患者中醫證候治療前后積分及療效比較
兩組治療前中醫證候積分沒有明顯區別,治療后均有所減少,觀察組的減少大于對照組(t=3.0447,P=0.0033)。觀察組中醫證候療效總有效率91.89%,高于對照組中醫證候療效總有效率72.97%,兩組比較差異有統計學意義(P
2.4 兩組患者治療前后前列腺液中SIgA、VCAM-1及血清VCAM-1的比較
兩組治療前前列腺液中SIgA、VCAM-1及血清VCAM-1均無明顯差異,治療后均有降低,觀察組的改善更優于對照組,兩組比較差異有統計學意義(P
3 討論
慢性前列腺炎是常見的男性疾病,通過了解詳細病史、體格檢查、實驗室及器械檢查等可以診斷,常應用NIH-CPSI指數對患者癥狀進行評分[12]。慢性前列腺炎病因眾多,炎癥感染、盆底肌功能損傷、免疫能力下降、神經病變及神經行為失常等因素作用,都可能引起前列腺組織炎癥,導致慢性前列腺炎發生[9]。炎癥反應調節中血清細胞因子起到了重要作用,SIgA由泌尿生殖道中漿細胞分泌到前列腺液中,抑制微生物黏附細胞組織,對黏膜免疫及炎癥發生發展起到重要作用[13-14]。VCAM-1根據結構屬于免疫球蛋白超家族,與其他粘附分子一起引導淋巴細胞或白細胞,穿過血管壁進入組織,常通過有活化的神經元細胞、內皮細胞、平滑肌細胞等表達。VCAM-1的表達不僅與免疫和炎癥反應有關,還與血管生成有關,隨VCAM-1的表達增加,血液中VCAM-1含量也增加,VCAM-1在血液中測定較容易,臨床實用價值較大。
慢性前列腺炎屬中醫學的“精濁”、“白”、“勞淋”等范疇[15-16]。慢性前列腺炎病因復雜、病機多樣,臨床應根據慢性前列腺炎患者的病因及病機特點,針對病變的關鍵,阻止疾病發展,對癥下藥從而達到治愈的目的[17]。對不同體質患者,在藥物劑量上,應不同斟酌;在化濕清熱藥物中,配伍溫陽益氣藥物;以藥物屬性來治療疾病屬性,即“實者瀉之”,“虛者補之”等[18]。研究表明,前列康片在一些男性疾病治療中,得到廣泛應用,對慢性前列腺炎、男性不育等療效顯著[19]。前列康片中:丹參有活血祛瘀,通止痛,清心除煩功效;水蛭有破血逐瘀,祛邪扶正功效;紅花有活血化瘀,散濕去腫的功效;桃仁有活血祛瘀,潤腸通便功效;黃柏有濕熱瀉痢,止癢止痛功效;失笑散有活血祛瘀,散結止痛功效;川牛膝有逐瘀通經,利尿通淋功效;穿破石有祛風利濕,散瘀止痛功效;紅景天有補氣清肺,益智養心功效;牡蠣有安寧心神,平肝潛陽功效;黃芪有增強免疫,保肝利尿功效[20]。
本研究通過比較患者臨床療效發現:觀察組臨床控制24例、顯效28例、有效18例、無效4例、總有效70例,對照組臨床控制16例、顯效32例、有效10例、無效16例、總有效58例。前列康片聯合頭孢呋辛酯片治療患者臨床療效總有效率94.59%,高于頭孢呋辛酯片治療患者臨床療效總有效率78.38%。比較患者治療前后NIH-CPSI指數發現:治療前所有患者疼痛或不適、排尿異常及生活質量沒有明顯差異,治療后疼痛或不適、排尿異常及生活質量都有顯著改善,前列康片聯合頭孢呋辛酯片治療患者的改善優于頭孢呋辛酯片治療患者。以上結果表明,前列康片聯合頭孢呋辛酯片治療使患者癥狀改善更佳,療效更好。
本研究通過比較患者中醫證候治療前后積分及療效發現:治療前所有患者中醫證候沒有明顯差異,治療后均有所改善,前列康片聯合頭孢呋辛酯片治療的患者改善大于頭孢呋辛酯片治療患者。前列康片聯合頭孢呋辛酯片治療患者中醫證候療效總有效率91.89%,高于頭孢呋辛酯片治療患者中醫證候療效總有效率72.97%。比較患者治療前后前列腺液中SIgA、VCAM-1及血清VCAM-1變化發現:治療前所有患者前列腺液中SIgA、VCAM-1及血清VCAM-1均無明顯差異,治療后均明顯降低,前列康片聯合頭孢呋辛酯片治療患者降低大于頭孢呋辛酯片治療患者。以上結果說明,前列康片利用其中醫藥特性,有效改善中醫癥候,作用于前列腺液中SIgA、VCAM-1及血清VCAM-1,對調節血清細胞因子抑制炎癥起到較好效果。
綜上所述,前列康片聯合頭孢呋辛酯片的治療方法,能有效調節血清細胞因子控制炎癥,對慢性前列腺炎治療起到較好效果,值得臨床應用。
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篇10
[關鍵詞]肝細胞生長因子;骨髓間充質干細胞;顆粒脂肪移植;血管形成;基因轉染
[中圖分類號]R62 [文獻標識碼]A [文章編號]1008-6455(2014)15-1260-04
Experimental study of transplanted mesenchymal stem cells transfected with adenoviral ventor mediated HGF gene enhance angiogenesis of grain fat grafts
WANG You-hu1,LIU Yi2
(1.Department of Otorhionolaryngology,Nead and Neck Surgery,The First Hospital Lanzhou University,Lanzhou 730000,Gansu,China;2.PLA Center of Plastic Surgery,Lanzhou General Hospital of Lanzhou Command, Lanzhou 730050,Gansu,China)
Abstract: Objective To investigate the angiogenetic effect of transplanting mesenchyma stem cells (MSCs) transfected with HGF gene on fat grafts. Methods MSCs of male Wistar rats were collected and cultured in vitro,and were transfected with Ad - GFP or Ad-HGF.The transfection infectivity of Ad - GFP to MSCs was assayed by fluorescent microsopy and flow cytometry.150rats were randomly divided into 5groups: control group (group A,30rats),MSCs group (group B,30 rats),Ad-HGF group (group C, 30rats),MSCs transplanted with Ad-GFP group(groupD,30rats), MSCs transplanted with Ad-HGF group(groupE, 30 rats).Then free fat tissue from inguinal region,mixed with MSCs,Ad-HGF,MSCs transplanted with Ad-GFP and MSCs transplanted with Ad-HGF respective,were transplanted to rats back, but control group were only mixed with DMEM-LG. fat grafts were obtained on day 3,5,7,14,28,60 implantation,The expression of CD34 in fat grafts were detected by immunohistochemistry. Results Transfection efficiency was correlated with the multiplicity of infection (MOI)and a highest transfection efficiency (86.4)could be achieved at MOI of 100.MSC expressed HGF at a high level after being transfected with the Ad-HGF for 48h .The HGF expression could maintain for at least two weeks.Microvesselquantity in group E was much more than that in other group (P
Key words:HGF;MSC;Fat grafts transplant;angiogenesis;gene transfection
Traktueue等[1]預測脂肪移植將來在修復組織缺損中將扮演重要的角色,但是顆粒脂肪移植后存在最大問題是移植脂肪因缺血、缺氧后液化壞死,易被吸收或形成囊腫、纖維化,從而影響遠期效果。因此,脂肪移植要取得進一步的進展,就要深入研究脂肪移植后的再血管化[2-3]。
骨髓間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一類重要的干細胞,可跨胚層分化為各類細胞。其容易分離和培養擴增,同時具有可移植性,易于外源基因轉染和表達,是基因治療理想的載體細胞。肝細胞生長因子( hepatic growth factor,HGF)是一種多功能的細胞因子,其生物學活性通過單一受體c-Met(c-met protoncogene product) 介導,引起細胞內一系列信號轉導途徑的級聯激活,從而調節細胞的增殖、分化、運動和血管生成等。基于此,我們用腺病毒為載體,把HGF基因導入骨髓間充質干細胞,然后與顆粒脂肪混合移植,充分發揮MSCs多項分化潛能和HGF強大的血管效應,旨在為顆粒脂肪移植建立新生血管誘導生物組織工程模式。
1 材料和方法
1.1實驗材料:Ad-GFP(攜帶綠色熒光蛋白的重組腺病毒)和Ad-HGF(攜帶人肝細胞生長因子基因的重組腺病毒),蘭州總醫院哈小琴老師惠贈;Percoll試劑(Amersham Pharmacia Biotech公司);兔抗人CD34多克隆抗體及SP試劑盒(武漢博士德生物工程公司);DMEM-LG培養基(Gibco公司);OLYMPUS XT70型熒光倒置顯微鏡(OLYMPUS公司,日本);流式細胞儀(BD公司,美國);Imge-Pro Plus 圖像分析軟件(Version 4.1)(美國Media Cybernetics公司)。
1.2MSCs的分離、培養與擴增:應用Percoll(1.073g/ml)密度梯度離心法從健康雄性Wistar大鼠(體重120g)的骨髓中分離得到單核細胞,接種于含10%胎牛血清的DMEM-LG培養液中,置于37℃、5%CO2 條件下培養,72h后換液。原代培養6d左右形成細胞克隆,約10天形成貼壁細胞層。胰蛋白酶消化后傳代擴增,第3~5代用于實驗。
1.3重組腺病毒介導GFP基因/HGF基因轉染MSCs:將細胞以1×106 接種于6孔板,貼壁后,棄去培養上清,加入含不同感染強度的Ad-GFP病毒顆粒的DMEM-LG培養基(0、25、50、100、200pfu/ cell)孵育2h,換含5%血清的培養基繼續培養48h檢測熒光。轉染48h后在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光強度并用流式細胞儀檢測轉染效率。Ad-HGF感染采用Ad-GFP轉染率最高的病毒強度。
1.4實驗動物分組處理及指標檢測
1.4.1實驗動物分組處理:150只雌性Wistar大鼠(蘭州總醫院動物實驗科提、供)隨機分為:空白對照組(A組 n=30)、Ad-HGF組(B組 n=30)MSC組(C組n=30)、Ad-GFP感染MSC組(D組 n=30)、Ad-HGF感染MSC組(E組 n=30)。用3%的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(40mg/kg)取腹股溝區脂肪1ml,均勻剪成小塊,用生理鹽水沖洗。A組 顆粒脂肪1ml+0.4mlDMEM-LG;B組 顆粒脂肪1ml+0.4ml DMEM-LG+1х108pfuAd-HGF液;C組顆粒脂肪1ml+0.4mlDMEM-LG+1×106MSC;D組顆粒脂肪1ml+0.4ml DMEM-LG+1×106MSC(攜帶GFP基因);E組顆粒脂肪1ml+0.4mlDME-LG+1×106MSC(攜帶HGF基因)均勻震動5min,用注射器接12號針頭注射于背部的皮膚與肌肉之間。3、5、7、14、28、60天每次各組取5只脫頸處死,并沿被膜分離出移植物,標本用10%富爾馬林固定,規制成石蠟切片, HE染色進行組織病理學觀察。
1.4.2 血管染色和血管計數方法:按照免疫組化SP法操作步驟進行,工作液濃度為1:150。每張切片分別在周邊區和中央區各選3個高倍(×4OO)視野,每個視野中進行微血管計數,然后求其均值。凡是染成棕色單個內皮細胞或內皮細胞簇均作為1個血管計數。
1.5統計學分析:所有數據采用SPSS11.5統計學軟件進行處理,數據用均數±標準差(x±s)表示, 并進行單因素方差分析和多個樣本均數之間的多重比較,P
2 結果
2.1MSCs 的體外培養:從骨髓中分離獲取的單個核細胞培養24h后逐漸出現貼壁細胞,換液逐漸除去未貼壁細胞,培養4天可見似分裂中的成纖維樣細胞,6天可見多個細胞克隆形成似,12~14天細胞形態不一、多呈梭形,90%以上融合。傳代細胞于24h內貼壁,10~12天融合。
2.2GFP基因/HGF基因在MSC中的高表達:Ad-GFP轉染對數生長期MSCs 48h后在熒光顯微鏡下觀察,在低倍的視野下呈“滿天星”狀,在高倍視野發綠色熒光的MSC,呈不規則形,有些細胞的輪廓清晰可見,有些融合成片(如圖1)。當MOI=100時,用FCM檢測GFP表達率89.6%,感染效率最高,說明重組腺病毒能夠有效的感染MSC。ELISA檢測HGF分泌量結果顯示,感染MSC后HGF基因可在短期內高效表達,48h表達量最高(如圖2)。
2.3 移植顆粒脂肪組織的病理學變化:所有移植體均被纖維被膜包裹。移植后5、7天,E組有大量的血管長入移植物(如圖3)。鏡下,早期脂肪移植物內及周圍有單核細胞、淋巴細胞、漿細胞及中性粒細胞浸潤,其中A、B、C、D中央液化壞死明顯,只有周邊脂肪組織結構完好;而E組壞死較少,且新生血管豐富,有些血管呈垂直狀向移植物延伸移植物。移植后26、60天E組包裹纖維被膜厚,而間隔較薄,體積保持明顯好于其他4組,細胞分化成熟。
2.4平均微血管密度記數:免疫組化染色后血管呈棕黃色,切片背景清晰,微血管形態不規則,管腔由染成棕黃色的內皮細胞圍成(如圖4)。腔內可見紅細胞,部分血管無明顯管腔呈條索狀,有的只見到單個或成團的內皮細胞, Ad-HGF轉染MSC組7天新生血管達到高峰,14天后趨于穩定。與其他4組相比較,在第3天無差異,但在術后5、7、14、28、60天時均有差異(P
3 討論
隨著目前分子生物學、基因轉染等技術的發展,為加速顆粒脂肪移植后血管的重建提供了新的思路。
HGF是一種特異的促內皮細胞生長因子,具有很強促血管內皮細胞有絲分裂、增生,抑制凋亡作用。在兔與小鼠缺血模型中,HGF 能刺激新生血管生成,且不論在體內還是體外試驗HGF 的血管生成活性比血管內皮生長因子(VEGF)及堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)更為強大[4]。但是,HGF半衰期短,費用高,局部給藥困難等缺點而難以推廣應用。而我們在HGF基因加速創面血管新生方面已取得了一定的進展[5]。
本實驗以腺病毒為介導,將HGF基因導入體外培養的MSCs中,和大鼠自體顆粒脂肪混合移植到其背部,發揮HGF強大的血管作用和MSC多項分化作用,共同協同促進顆粒脂肪移植體的新生血管。實驗結果顯示,Ad- HGF轉染MSC組新生血管生成7天達高峰,提前于其他四組和文獻報道[6]的14天,且無論在早期還是長期移植體血管的數量明顯多于其他4組(P
MSCs不僅免疫毒性很低,易于外源基因轉染和表達等優點,而且移植后可促進新生血管的生成,其途徑:①MSC產生VEGF、bFGF、PDGF血管生成素;②能分化成血管內皮細胞和平滑肌細胞[9]。實驗結果也顯示MSC組的新生血管平均數量多余空白對照組。至于MSC是否像文獻報道那樣能分化成血管內皮細胞和平滑肌細胞,有待進一證明。
本實驗選用腺病毒為載體,該病毒有以下優點:安全、無致畸,致病及致癌性;對分裂細胞及癌細胞株的轉染效率達到90%~100%;腺病毒感染細胞時DNA不整合到宿主細胞染色體中;腺病毒容易制備、純化和濃縮,可達到較高滴度;腺病毒載體插入外原基因的容量較大。實驗結果顯示通過腺病毒介導,GFP基因/HGF基因成功導入MSCs,并高效表達。
綜上所述,骨髓間充質干細胞經轉染肝細胞生長因子基因后能持續的表達HGF,從而有效的促進自體顆粒脂肪移植后新生血管的生成,有望提高脂肪移植的遠期效果。但是要將基因治療與干細胞移植真正應用于臨床,必須進一步研究這種促血管生物工程模式的安全性、穩定性和可控性。
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